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文檔簡介
1、L-抗壞血酸(簡稱VC)在體內發(fā)揮著重要的生理作用,但其還原性強,極不穩(wěn)定,這使得它在應用上受到了很大的限制.VC的衍生物則大大提高了它的穩(wěn)定性,而不影響它的生理功能.該課題就其衍生物之一2-O-葡萄糖基抗壞血酸在糖基轉移酶的作用下的生物合成及產物分離純化作了較系統(tǒng)的研究.該課題以嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus.stearothermophilis)為出發(fā)菌株,通過單因素實驗,初步確立了其產生糖基轉移酶的培養(yǎng)基碳源為1％葡萄糖,氮源
2、為0.5％蛋白胨,培養(yǎng)基裝量為250ml三角瓶中裝30ml,接種量為4％,培養(yǎng)基初始pH為8.0,培養(yǎng)溫度為55℃.采用正交實驗,得出生物轉化反應的最佳條件為:以CMC-Na為葡萄糖基的供體,濃度為0.04mol/L VC作為受體,酶量是25mL,pH值4.0,溫度60℃下反應16hr.采用紫外線誘變育種,篩選到一株酶轉化能力提高了149.28％的菌株Z3104,使AA-2G含量達到了274.78mg/L.將Plackett-Burma
3、n法與響應面分析法相結合,利用origin軟件優(yōu)化菌種產酶條件,得最佳條件為:葡萄糖2％,蛋白胨0.6％,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.01％,KH<,2>PO<,4>0.0625％,初始pH為7.15,48℃,200r/min培養(yǎng)48小時,在此條件下所產的酶轉化得產物含量為375.24mg/L,比優(yōu)化前提高了41.16％.最后,對B.stearothermophilis產酶發(fā)酵過程進行了發(fā)酵罐放大研究,使菌體產酶量和活力提高,
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