熊果酸載藥納米微球的制備及其體內(nèi)外抗腫瘤的效果評價.pdf

1、背景：熊果酸是存在于天然植物中的一種五環(huán)三萜類化合物。研究表明，熊果酸具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種生物學效應，其中抗腫瘤是最為突出的作用，其對多種促癌、致癌物有明顯抵抗作用，同時對多種腫瘤細胞有明顯的細胞毒作用、誘導分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已在臨床中受到越來越多的重視。但熊果酸作為脂溶性藥物，不溶于水，生物利用度低，嚴重影響了熊果酸的臨床應用。為了解決上述問題，納米載藥體系以其獨特的優(yōu)勢進入了我們的視線。將納米技術和藥物治

2、療結(jié)合產(chǎn)生的納米給藥系統(tǒng)用于抗腫瘤納米藥物的設計是目前研究的熱點。高分子納米給藥體系除了具有增加藥物的溶解度，緩釋、控釋等傳統(tǒng)藥物輸送體系所具有的作用外，由于其自身的特殊性，在藥物輸送中體現(xiàn)出許多特有的應用優(yōu)勢，如載藥納米微球可以延長其體內(nèi)的循環(huán)時間，提高藥物的吸收和生物利用度，且增加了對腫瘤病灶部位的靶向性等，這為腫瘤治療提供了一種新的思路。
　　目的：分別選用聚己內(nèi)脂—聚乙二醇(mPEG-PCL)和聚己內(nèi)脂—聚乙烯吡咯烷酮(P

3、VP-PCL)兩種高分子聚合物作為藥物載體，構(gòu)建兩種高載藥量的熊果酸載藥納米微球，通過測量其理化性質(zhì)、考察其穩(wěn)定性、釋放性質(zhì)，并且分別在胃癌和肝癌細胞上驗證其抗腫瘤的優(yōu)越性，為這種新型的控釋納米給藥系統(tǒng)的進一步開發(fā)提供科學根據(jù)。
　　方法：采用開環(huán)聚合法制備mPEG-PCL和PVP-PCL兩種高分子聚合物，采用溶劑分散法制備兩種熊果酸載藥納米微球。通過掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察納米微球的形態(tài)，并用動態(tài)光散射儀測定納米微球的

4、粒徑。測定并計算得出納米微球的載藥量和包封率，并且測定兩種載藥微球的體外釋放曲線。在體外細胞及體內(nèi)動物模型上研究兩種熊果酸載藥納米微球的抗腫瘤效果并探討其可能的抗腫瘤機制。
　　結(jié)果：⑴成功制備了負載熊果酸的mPEG-PCL納米微球，通過對其表征檢測發(fā)現(xiàn)其為表面光滑的不規(guī)則的圓形，其粒徑為144.0±4.0 nm。載藥量為4.75±0.45％，包封率為87±5.3％。體外釋放曲線顯示了熊果酸載藥納米微球良好的緩釋特性。⑵通過體外細

5、胞抗腫瘤實驗，發(fā)現(xiàn)了熊果酸納米微球?qū)τ谌宋赴㏒GC-7901細胞的殺傷效果明顯強于熊果酸裸藥，且呈明顯的時間和濃度依賴性，驗證了負載熊果酸的mPEG-PCL納米微球較裸藥的優(yōu)越性，而空白納米微球?qū)毎L基本沒有任何抑制作用，DAPI染色試驗發(fā)現(xiàn)，相同濃度含量的熊果酸納米微球較熊果酸裸藥能夠誘導更多的凋亡小體產(chǎn)生，Western blot研究結(jié)果顯示，熊果酸納米微球較熊果酸裸藥顯著抑制COX-2的蛋白表達，COX-2與Caspase-3

6、的蛋白表達呈顯著負相關，抑制COX-2的表達可以顯著升高Caspase-3的表達，誘導胃癌細胞的凋亡，抑制腫瘤發(fā)生和進展。⑶為了優(yōu)化納米藥物載體，我們采用了聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作為PEG的替代品，成功制備了負載熊果酸的PVP-PCL納米微球，本實驗所制備的熊果酸微球的載藥量達到了12％以上，包封率高達近85％，體外釋放曲線同樣顯示了熊果酸載藥納米微球良好的緩釋特性。⑷在體外腫瘤細胞實驗中，我們發(fā)現(xiàn)空白納米微球?qū)毎L基本沒有任何抑

7、制作用，說明了PVP-PCL載藥納米微球的安全性。而熊果酸裸藥及熊果酸納米微球?qū)π∈蟾伟〩22細胞的生長抑制作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。且熊果酸納米微球?qū)τ谀[瘤細胞的殺傷效果都明顯強于熊果酸裸藥，通過流式細胞儀檢測熊果酸納米微球?qū)毎蛲龅挠绊?，我們同樣可以發(fā)現(xiàn)熊果酸納米微球在誘導肝癌細胞凋亡的作用上明顯優(yōu)于熊果酸裸藥，動物實驗顯示了熊果酸納米微球更為優(yōu)越的抑瘤效果。通過Western blot和免疫組織化學法檢測相關的目的蛋白表達情況，