三叉神經(jīng)根區(qū)周圍蛛網(wǎng)膜粘連與HSV-1感染關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的:原發(fā)性三叉神經(jīng)痛病因復雜,其發(fā)病機制國際上存在許多學說,但沒有一種學說能完全解釋其病因。目前,在眾多學說中,血管壓迫學說得到了廣大臨床醫(yī)師的認可,且顯微血管減壓術(shù)(Microvasoular decompression,MVD)治療三叉神經(jīng)痛療效確切,但仍有一少部分患者經(jīng)MVD治療后療效欠佳。此類患者在術(shù)中多發(fā)現(xiàn)三叉神經(jīng)根區(qū)的蛛網(wǎng)膜粘連較嚴重,粘連的蛛網(wǎng)膜包繞三叉神經(jīng)根及周圍的動脈,加劇了動脈對三叉神經(jīng)根的壓迫。經(jīng)臨床觀察發(fā)現(xiàn)此類

2、患者術(shù)后大多會在同側(cè)三次神經(jīng)分布區(qū)出現(xiàn)面部皰疹。據(jù)單純皰疹病毒Ⅰ型(Herpessimplex virus-1,HSV-1)的生物學特性,考慮三叉神經(jīng)根區(qū)的蛛網(wǎng)膜粘連與術(shù)后的面部皰疹的發(fā)生可能與HSV-1的感染有關(guān)。本實驗目的是研究三叉神經(jīng)痛患者三叉神經(jīng)根區(qū)周圍蛛網(wǎng)膜粘連與HSV-1感染的關(guān)系,從病毒感染引起蛛網(wǎng)膜粘連的角度分析病毒感染是導致三叉神經(jīng)痛的病因之一,并為今后三叉神經(jīng)痛的病毒病因的研究及臨床治療做參考。
　　 方法:

3、實驗組40例蛛網(wǎng)膜標本,取自山東省濟寧市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科自2008年1月至2010年7月三又神經(jīng)痛患者MVD時,三叉神經(jīng)根區(qū)明顯粘連的蛛網(wǎng)膜。40例患者術(shù)后同側(cè)三叉神經(jīng)分布區(qū)出現(xiàn)面部皰疹的有17例,留取面部皰疹液。對照組20例蛛網(wǎng)膜標本,取自顱腦外傷患者的蛛網(wǎng)膜標本(橋腦小腦區(qū))。每例蛛網(wǎng)膜分成三部分,分別做:(1)石蠟病理切片:將蛛網(wǎng)膜組織用10％中性福爾馬林固定12小時,自動組織處理機梯度酒精脫水,二甲苯透明,浸蠟;石蠟切片機上

4、連續(xù)切片厚度3um,選擇完整、無劃痕、厚薄均勻的蠟片2片,附在載玻片上烤片20分鐘;再將切片經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度水化,依次經(jīng)蘇木素染色,氨水返藍,伊紅染色,梯度酒精脫水,二甲苯透明中性膠封固。(2)PCR檢測蛛網(wǎng)膜及面部皰疹液內(nèi)HSV-1特異性基因片段:組織破碎,提取總DNA,引物選取6+C含量約50％的無發(fā)卡結(jié)構(gòu),相互間無同源序列的兩段特異保守序列,擴增片段為452bp。擴增產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖凝膠上電泳,加溴化乙錠等顯色劑。(3)HS

5、V-1單克隆抗體檢測蛛網(wǎng)膜及面部皰疹液內(nèi)特異性抗原的表達:蛛網(wǎng)膜組織提取總蛋白,沸水5分鐘使蛋白變性,將蛋白移至配制好的SDS-PAGE凝膠上電泳,電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上,脫脂牛奶封閉非蛋白結(jié)合位點,加鼠抗人HSV-1單克隆抗體過夜;加辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體充分結(jié)合,加顯色劑顯色。
　　 結(jié)果:實驗組的蛛網(wǎng)膜病理切片中,光鏡下見粘連的蛛網(wǎng)膜主要有6種病理變化:炎細胞浸潤23例、組織水腫6例、玻璃樣變性3例、病

6、理性鈣化1例以及粘液樣變性7例。對照組的蛛網(wǎng)膜病理切片光鏡下發(fā)現(xiàn)有1例輕度炎細胞浸潤伴粘液樣變性,有3例細胞輕度水腫,余均為正常蛛網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。兩組間病理變化情況Fisher's精確概率計算p＜0.00。實驗組40例蛛網(wǎng)膜標本中檢測到HSV-1特異性基因片段者有29例,其陽性率為72.5％;7例檢測到有HSV-1特異性抗原的表達,其陽性率為17.5％。即以潛伏感染為主,少部分呈增值性感染。17例實驗組的患者術(shù)后面部水皰液內(nèi)有15例檢測到有H

7、SV-1特異性DNA片段,12例檢測到有HSV-1特異性抗原的陽性表達,即病毒多在增殖期。對照組有4例標本檢測到HSV-1特異性基因片段,未檢測抗原表達。卡方檢驗比較兩組間病毒感染的陽性率有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),且蛛網(wǎng)膜組織內(nèi)有HSV-1感染病例與沒有感染的病例其病理變化有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.單純皰疹病毒Ⅰ型可以在蛛網(wǎng)膜內(nèi)形成潛伏。
　　 2.三又神經(jīng)根區(qū)蛛網(wǎng)膜的粘連與單純