“勞倦過度、房室不節(jié)”腎陽虛模型小鼠及其以藥反證腦基因表達譜的研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用基因芯片技術探討“勞倦過度、房室不節(jié)”腎陽虛模型小鼠及其補腎中藥金匱腎氣丸、右歸丸治療后腦基因表達譜的改變，“以藥反證”，并在分子水平上研究藥物的作用機理，同時還比較二方劑作用的基因變化。 方法：對照組、造模組、金匱腎氣丸組和右歸丸組，各組雄性小鼠隨機為10只、15只、10只和10只。四組均予正常喂養(yǎng)，對照組和造模組每天灌胃蒸餾水0．5mL/只，二治療組每天分別灌胃金匱腎氣丸混懸液0．5mL/只和右歸丸混懸液

2、0．5mL/只，造模組和二治療組均采用雄雌鼠比例1：6同籠喂養(yǎng)和雄鼠每日游泳至無力下沉共4周，以誘導產(chǎn)生“勞倦過度、房室不節(jié)”腎陽虛證。用36K mouse genome array鼠腦芯片檢測正常對照組和腎陽虛模型組鼠腦基因，并以二者熒光信號相對強度比值≥2和≤0．5篩選差異顯著基因，并進一步查閱北京博奧生物分子注釋系統(tǒng)，進行基因功能歸類。為進一步驗證芯片所檢測的差異基因，還應用Real-Time PCR對部分差異顯著基因進行檢測驗證

3、。 結果：造模組誘導成功“勞倦過度、房室不節(jié)”腎陽虛鼠模型，同時通過基因芯片檢測，分別繪制了造模組/對照組與二治療組/造模組基因表達譜的散點圖。造模組/對照組共篩選出186個差異表達基因，其中上調基因150個，下調基因36個。金匱腎氣丸組/造模組篩選出299個差異表達基因，其中上調基因114個，下調基因185個。右歸丸組/造模組篩選出155個差異表達基因，其中上調基因64個，下調基因91個。二治療組/造模組基因均上調的基因24個

4、，分別占各組上調基因的21．05%和37．50%，其主要是與神經(jīng)傳遞/信號轉導、轉錄/翻譯、激素、細胞周期和代謝相關的基因；二治療組均下調的有35個基因，分別占各組下調基因的18．92%和38．46%，其主要是與轉錄/翻譯、神經(jīng)傳遞/信號轉導、炎癥/免疫、代謝以及影響多巴胺生成的限速酶有關基因。造模組/對照組上調基因而治療組/造模組基因下調的有23個基因，其主要是與炎癥/免疫、神經(jīng)傳遞/信號轉導等相關基因；造模組/對照組下調基因而治療組

5、/造模組基因上調的基因有6個，其主要是與細胞周期/細胞結構、神經(jīng)傳遞/信號轉導、轉錄等有關基因。 結論：造模組上調基因主要涉及與炎癥/免疫、氧化應激等有關基因，使得炎癥/免疫和氧化反應增強，創(chuàng)傷、損傷反應和凝血機制增強，這些都是機體的保護性反應所致，還有多巴胺神經(jīng)介質分泌減少引起多巴胺能神經(jīng)紊亂。下調基因主要與激素（特別是黑色素濃集素和性激素）、細胞周期、信號轉導/神經(jīng)傳遞、代謝（特別是蛋白質代謝）和生長發(fā)育（特別是腦發(fā)育和精子