腎陽虛證排卵障礙性不孕的差異基因表達譜研究.pdf

1、目的:
　　以腎陽虛證排卵障礙性不孕患者為研究對象制作腎陽虛證的基因表達譜，篩選差異基因(P＜0.05)，探討腎陽虛證的分子通路及微觀分子機制，為“腎生生殖”的本質(zhì)提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1、病例選擇:2011年6月至2011年12月在成都中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院中醫(yī)婦科門診選取陽虛體質(zhì)腎陽虛證排卵障礙性不孕患者為研究對象，確診為典型腎陽虛證患者為病例組;選取典型平和質(zhì)健康者為對照組。
　　2、基因芯片樣品

2、制作和送樣:抽取每組研究對象外周血液，編號，分離白細胞，將分離出的每一管白細胞轉(zhuǎn)入1.5mlEP管，并迅速放置于液氮中保存。及時將樣本從液氮中取出包裝后埋入干冰，采用壁厚且質(zhì)量完好的泡沫箱嚴格密封后通過快遞公司空運送于上海伯豪生物技術(shù)有限公司（填寫樣品登記單）。
　　3、基因芯片實驗（芯片公司）:樣品質(zhì)檢，全部合格后進入實驗階段，提取總RNA，純化以完成探針的制備，運用基因芯片技術(shù)進行芯片雜交及掃描，得到病人-正常對照組表達譜數(shù)據(jù)

3、，SAS軟件統(tǒng)計完成差異基因表達篩選(P＜0.05)。
　　4、對差異基因進行GO功能富集度分析和KEGG通路分析。
　　結(jié)果:
　　1、共納入受試者10例，剔除4例，進入分析6例:經(jīng)臨床評定確診排卵障礙性不孕、陽虛體質(zhì)典型腎陽虛證候病例組3例，健康典型平和質(zhì)者對照組3例。
　　2、腎陽虛證排卵障礙性不孕病例組和對照組存在差異基因表達特征圖譜。獲得650條差異基因表達(P＜0.05)。其中上調(diào)266條，下調(diào)384

4、條，下調(diào)基因占59.1％。獲得基因名稱及其基本信息的有480條。
　　3、通過GO功能富集度分析，發(fā)現(xiàn)差異基因主要涉及核糖體結(jié)構(gòu)組成中的核糖體蛋白泛素化、囊泡目標、建立蛋白定位，染色體分離，組織重塑、細胞前緣、運動的積極調(diào)控等多個生物學過程。
　　4、通過KEGG通路分析，差異基因參與代謝通路、TGF-β信號通路、蛋白質(zhì)泛素化、遺傳信息處理通路如DNA剪接及卵母細胞減數(shù)分裂、金屬離子通路、免疫通路（造血干細胞系）、內(nèi)吞作用以

5、及粘著路口等人類病證各相關(guān)的通路。以代謝通路和TGF-β信號通路最多。
　　5、發(fā)現(xiàn)與生殖相關(guān)的基因:PRSS21、TP53TG3、LAST1、CCR4、SEC24A。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用基因芯片進行基因轉(zhuǎn)錄組學分析是一種有良好發(fā)展前景的中醫(yī)證候?qū)W研究方法。
　　2、排卵障礙性不孕疾病與腎陽虛證病證結(jié)合，豐富了腎陽虛證候的基因庫，深化了腎陽虛證微觀分子生物學機制，為“腎藏精、主生殖”理論提供了客觀的依據(jù)。<