RASAL1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性行為的影響.pdf

1、背景與目的:已有研究表明，RAS-RAF-MEK-ERK細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路異常在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但導(dǎo)致該信號(hào)通路活性變化的機(jī)制尚不明確。近年發(fā)現(xiàn)RAS proteinactivator like-1(RASAL1)基因可調(diào)節(jié)RAS活性變化，本研究對胃癌細(xì)胞中該基因的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。
　　方法:通過RNA干擾技術(shù)向高分化胃癌細(xì)胞MKN-28中轉(zhuǎn)染RASAL1-shRNA構(gòu)建RASAL1低表達(dá)的RASAL1-shRNA

2、組細(xì)胞株，另外通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)向低分化胃癌細(xì)胞BGC-823中轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-RASAL1質(zhì)粒載體構(gòu)建RASAL1高表達(dá)的pcDNA3.1-RASAL1組細(xì)胞株。之后通過RT-PCR和Western blotting技術(shù)對各組細(xì)胞中RASAL1 mRNA和蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，以觀察MKN-28 RASAL1-shRNA和BGC-823 pcDNA3.1-RASAL1細(xì)胞是否構(gòu)建成功。再用pull-down和Western bl

3、otting技術(shù)對各組細(xì)胞中RAS-GTP和磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase，p-ERK1/2)的表達(dá)情況進(jìn)行分析。并分別使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡、Transwell小室等方法分別對各組細(xì)胞的增殖能力、凋亡情況以及侵襲和遷移能力等進(jìn)行進(jìn)一步檢測。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染后各組

4、細(xì)胞中RASAL1 mRNA和蛋白的檢測結(jié)果證實(shí)MKN-28 RASAL1-shRNA和BGC-823 pcDNA3.1-RASAL1細(xì)胞構(gòu)建成功。MKN-28 RASAL1-shRNA組較其空白和陰性對照組，RAS-GTP和p-ERK1/2的表達(dá)增高，同時(shí)增殖能力以及侵襲和遷移能力也提高，但凋亡率減低。BGC-823 pcDNA3.1-RASAL1組較其空白和陰性對照組，RAS-GTP和p-ERK1/2的表達(dá)減低，同時(shí)增殖能力以及侵襲