miR-130b-5p通過靶向調(diào)控RASAL1基因影響胃癌發(fā)生發(fā)展.pdf

1、目的：驗(yàn)證miR-130b-5p和RASAL1基因的靶向關(guān)系并深入探究miR-130b-5p對胃癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力的影響。
　　方法：熒光定量PCR檢測miR-130b-5p在6株胃癌細(xì)胞及1株正常胃黏膜細(xì)胞中的表達(dá)，篩選出miR-130b-5p表達(dá)明顯增加的MGC803細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。將miR-130b-5p mimics和miR-130b-5p inhibitor轉(zhuǎn)染入MGC803細(xì)胞造成miR-130b-5p高

2、表達(dá)及低表達(dá)。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)證明miR-130b-5p和RASAL1的靶向關(guān)系，熒光定量PCR檢測miR-130b-5p高表達(dá)及低表達(dá)條件下RASAL1在mRNA水平的表達(dá)，WB實(shí)驗(yàn)檢測miR-130b-5p高表達(dá)及低表達(dá)條件下RASAL1的蛋白表達(dá)水平。通過細(xì)胞增殖試驗(yàn)、集落形成試驗(yàn)和Transwell試驗(yàn)分別檢測miR-130b-5p對胃癌細(xì)胞的增殖、集落形成、遷移和侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：在胃癌細(xì)胞中miR-13

3、0b-5p的表達(dá)明顯增加且RASAL1表達(dá)明顯降低。熒光素酶報告基因試驗(yàn)證明RASAL1基因是miR-130b-5p的靶基因。與對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-130b-5p mimics后RASAL1的表達(dá)明顯降低，轉(zhuǎn)染miR-130b-5p inhibitor后RASAL1的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。與對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-130b-5p mimics的實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)出更高的細(xì)胞增殖，集落形成及遷移侵襲能力，轉(zhuǎn)染miR-130b-5p i