USP14去泛素化vimentin及miR-320a下調(diào)USP14和vimentin來(lái)共同調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的惡性行為.pdf

1、目的：
　　胃癌（Gastric cancer）是消化道的一種常見惡性癌癥，是世界上導(dǎo)致死亡的第三種癌癥。盡管近年來(lái)胃癌的診斷和治療得到了進(jìn)一步的發(fā)展，但由于胃癌的轉(zhuǎn)移和再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)比較高，胃癌的死亡率仍然很高。因此，研究胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制十分重要，并且缺乏有效的生物標(biāo)志物檢測(cè)早期胃癌的發(fā)生及發(fā)展?，F(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究利用血清蛋白抗原，致癌基因或基因家族通過先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，如微陣列、RNA-Seq等等，探究了許多潛在的胃癌生物標(biāo)記

2、基因。近年來(lái)，vimentin在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）和癌癥生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移過程中起的重要作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。本課題主要研究vimentin、USP14和miR-320a在胃癌細(xì)胞中的惡性行為，探究它們?cè)谖赴┲邢嗷フ{(diào)節(jié)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，為胃癌的早期診斷和轉(zhuǎn)移治療提出一個(gè)新的思路。
　　方法：
　　首先應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)胃癌組織中vimentin的表達(dá)水平，并研究vimentin在胃癌惡性行為中的作用。接著，我們尋找研究 vimen

3、tin在胃癌組織和正常癌旁組織之間表達(dá)差異的影響機(jī)制及其對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的影響，運(yùn)用泛素化和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（Co-IP）來(lái)探究 vimentin表達(dá)水平增高的調(diào)節(jié)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)USP14通過影響 vimentin的泛素化進(jìn)而影響其在胃癌中的表達(dá)水平。然后，分別運(yùn)用MTT、集落形成、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)USP14對(duì)胃癌細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖能力、遷移和侵襲能力的作用，證實(shí)了USP14對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的影響。此外，我們通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析發(fā)

4、現(xiàn) miR-320a可以同時(shí)靶定和下調(diào)vimentin和USP14，接著，我們又進(jìn)一步研究了miR-320a對(duì)胃癌惡性行為的影響。最后，運(yùn)用RT-qPCR檢測(cè)了USP14及miR-320a在胃癌組織及正常胃組織中差異性表達(dá)及相關(guān)性分析，闡明了 miR-320a可以通過對(duì) vimentin和 USP14的調(diào)節(jié)作用來(lái)抑制胃癌的惡性行為。
　　結(jié)果：
　　RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌組織與癌旁正常組織相比 vimentin的表達(dá)水平

5、顯著增高，MTT、集落形成、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)表明 vimentin促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。進(jìn)一步的泛素化實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明了USP14與vimentin具有相互作用，并且USP14通過去泛素化vimentin來(lái)增加vimentin在胃癌細(xì)胞中表達(dá)水平。細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)證明了 USP14也促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。此外，發(fā)現(xiàn)miR-320a與 vimentin和 USP14的3’UTR具有特異性結(jié)合位點(diǎn)，并且發(fā)現(xiàn)miR-320a直接靶定和下

6、調(diào) USP14和 vimentin，并且通過細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)證明了miR-320a在胃癌組織中具有抑癌作用。最后， RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中， miR-320a與USP14和vimentin均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　胃癌組織中vimentin表達(dá)水平增高，并且vimentin可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。進(jìn)一步我們研究發(fā)現(xiàn)USP14可以通過去泛素化vimentin來(lái)增加其在胃癌細(xì)胞的表達(dá)水平。此外，我們發(fā)現(xiàn)了mi