PI3K-AKT及ERK-MAPK信號通路在面神經損傷再生過程中的作用機制研究.pdf

1、第一部分面神經損傷后PI3K/AKT及ERK/MAPK信號通路對面神經元存活的作用觀察
　　目的:維持足夠數量的存活神經元是周圍神經損傷后軸突再生、神經功能恢復的重要前提，因此了解面神經損傷后神經元存活的分子機制有助于減少神經元的死亡，促進軸突的再生。
　　方法:SD大鼠40只，隨機分為空白對照組，單純切斷吻合組，U0126抑制劑組和LY294002抑制劑組。術后1，3，7，14，28天分別檢測單純切斷吻合組大鼠損傷側面神經

2、元的存活率和凋亡指數，以及P-ERK和P-AKT的表達水平。術后7天檢測U0126抑制劑組和LY294002抑制劑組面神經元的存活率和凋亡指數，以及P-ERK和P-AKT的表達水平。
　　結果:(1)面神經元的存活率在傷后1，3天與空白對照組相比差異無統計學意義(P＞0.05)，傷后7天開始差異有統計學意義(P＜0.05)，并在傷后14天達最低，14天與28天相比差異無統計學意義(P＞0.05);傷側面神經元的凋亡指數在傷后14天

3、達最高，與此前時間點相比差異有統計學意義(P＜0.05)，與28天相比差異無統計學意義(P＞0.05)。(2)傷后1天開始P-ERK在傷側面神經元中表達增強，直至14天都維持于較穩(wěn)定的水平，傷后28天表達下降;傷后1天開始P-AKT在傷側面神經元中表達增強，直至28天都維持于較穩(wěn)定的水平。(3)傷后7天U0126抑制劑組和單純切斷吻合組的面神經存活率差異無統計學意義(P＞0.05)，LY294002抑制劑組的面神經元存活率低于單純切斷吻

4、合組，差異有統計學意義(P＜0.05); U0126抑制劑組和單純切斷吻合組的面神經元凋亡指數差異無統計學意義(P＞0.05)，LY294002抑制劑組的面神經元凋亡指數高于單純切斷吻合組，差異有統計學意義(P＜0.01)。
　　結論:(1)面神經切斷吻合后面神經元的存活率逐漸降低，并伴有傷側面神經元凋亡指數的逐漸升高，14-28天面神經元存活率在降到最低后達到穩(wěn)定。(2)面神經切斷損傷可導致面神經元中P-ERK和P-AKT表達水

5、平的升高，PI3K/AKT信號通路在體內能夠促進神經元的存活，而ERK/MAPK信號通路無促進神經元存活的作用。
　　第二部分 PI3K/AKT及ERK/MAPK信號通路對新生軸突形成影響的實驗研究
　　目的:周圍神經損傷再生的過程中，近遠端的軸突及其周圍的雪旺細胞發(fā)生一系列形態(tài)和功能上的改變，這些復雜的生理變化之間存在著交互的聯系，研究其內在的調控過程有助于更完整的了解周圍神經損傷再生的機制。
　　方法:SD大鼠55

6、只，隨機分為空白對照組，單純切斷吻合組，U0126抑制劑組和LY294002抑制劑組。術后1，3，7，14，28天分別檢測單純切斷吻合組P-ERK和P-AKT在損傷側近遠段軸突的表達。術后7天檢測單純切斷吻合組，U0126組和LY294002組P-ERK和P-AKT在損傷側近遠段軸突的表達，新生軸突的再生距離，新生軸突的數量，有髓纖維的數量以及雪旺細胞的分化狀態(tài)。
　　結果:(1)傷后1天P-ERK在軸突中的表達即較對照組增強，并

7、逐漸升高，7天達最高，14天表達下降，28天降至損傷前水平，P-ERK在不同時間點軸突近段的表達都要高于遠段。傷后1天P-AKT在軸突中表達較對照組明顯增強，并以軸突的近段更顯著，3天P-AKT的表達與1天相近，7天P-AKT在軸突近段的表達下降，在遠段的表達增至最高并維持至14天，28天P-AKT的表達在軸突的近遠中段都下降，但仍高于對照組。(2)傷后7天，U0126組P-ERK在軸突中的表達顯著低于單純切斷吻合組;LY294002組

8、P-AKT在軸突中的表達顯著低于單純切斷吻合組。U0126組軸突縱切面GAP-43的表達明顯低于單純切斷吻合組(P＜0.01)，軸突橫切面GAP-43的表達與單純切斷吻合組的差異無統計學意義(P＞0.05)。LY294002組軸突橫、縱切面GAP-43的表達均低于單純切斷吻合組(P＜0.05);U0126組雪旺細胞中P75的表達水平顯著低于單純切斷吻合組(P＜0.01)，而P0的表達水平高于單純切斷吻合組(P＜0.01)，LY29400

9、2組雪旺細胞中P75和P0的表達水平均與單純切斷吻合組無明顯差異(P＞0.05); P-ERK主要表達于P75陽性的雪旺細胞中，P-AKT主要表達于P0陽性的雪旺細胞中。
　　結論:(1)面神經切斷損傷可在軸突中激活ERK/MAPK信號通路，并在體內促進新生軸突的延長，PI3K/AKT信號通路同時在軸突中被激活，并可促進新生軸突的延長及分支生長。(2) PI3K/AKT和ERK/MAPK信號通路均在損傷后的雪旺細胞中被激活，P-E