山東省兒童孤獨(dú)癥全基因組掃描.pdf

1、孤獨(dú)癥（autism）是兒童廣泛性發(fā)育障礙（pervasive developmental disorder，PDD）的一種類型，男女比例為4～10：1。起病于嬰幼兒期，主要表現(xiàn)為不同程度的言語發(fā)育障礙、人際交往障礙、興趣狹窄和行為方式刻板。孤獨(dú)癥屬于多基因遺傳病，有較高的遺傳異質(zhì)性。 定位克隆方法在單基因遺傳性疾病研究中的成功運(yùn)用，激發(fā)了人們研究多基因疾病的希望和熱情，定位克隆作為一種成熟的技術(shù)方法，可以揭示精神疾病的遺傳病因

2、。我們采用了Barcellos（1997）等提出的用DNA混合池全基因組掃描關(guān)聯(lián)分析方法，完成了對(duì)山東省38例兒童孤獨(dú)癥患者，患兒父母以及1000例正常對(duì)照者的全基因組掃描關(guān)聯(lián)分析研究，共發(fā)現(xiàn)了4個(gè)關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。 目的:用DNA混合池（DNA pooling）的方法，通過覆蓋全基因組的400個(gè)微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記（STR）對(duì)兒童孤獨(dú)癥患者、父母以及正常對(duì)照者進(jìn)行基因組掃描，尋找與本病關(guān)聯(lián)的遺傳位點(diǎn)。 對(duì)象和方法: 1、對(duì)象

3、 采用國際精神疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)ICD-10作為兒童孤獨(dú)癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇在山東省精神衛(wèi)生中心就診的孤獨(dú)癥患兒38例，患兒父母75例，對(duì)照組選擇了山東省血液中心的獻(xiàn)血者1000例。 2、方法 2．1 采用傳統(tǒng)的酚-氯仿法提取被試者外周靜脈血基因組DNA。采用BECKMAN，DU530紫外分光光度儀（美國貝克曼公司）測(cè)定DNA濃度。用雙蒸水將DNA樣品稀釋至終濃度20 ng/μL。 2．2 每個(gè)樣本取10μL濃度

4、為20 ng/μL的DNA溶液進(jìn)行混合，分別構(gòu)建患兒組，父母組和對(duì)照組DNA混合池。 2．3 選用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（Applied Biosystem，ABI）的Linkage Mapping Set2．5試劑盒，共400對(duì)微衛(wèi)星引物，其平均遺傳間距為10 cM（厘摩）。逐一對(duì)38例孤獨(dú)癥患者、75例患者父母與1000例正常對(duì)照者組成的DNA混合池樣本進(jìn)行DNA擴(kuò)增，然后在3100 Avant（Applied Biosyst

5、em，ABI）毛細(xì)管遺傳分析儀上進(jìn)行基因組掃描，用Genemapper4．0軟件進(jìn)行基因分型。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理混合池DNA樣本經(jīng)PCR擴(kuò)增和基因分型后，可產(chǎn)生由一系列等位基因構(gòu)成的等位基因圖譜（allele image pattern，AIP）。采用Clump2．3軟件對(duì)患兒組、父母組和正常對(duì)照組每個(gè)位點(diǎn)上的等位基因頻率進(jìn)行計(jì)算，分別比較患兒組與父母組，患兒組與正常對(duì)照組之間基因頻率的差異，以P<0．01作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)，

6、確定關(guān)聯(lián)遺傳位點(diǎn)。 結(jié)果: 通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，我們最終獲得了所有400個(gè)位點(diǎn)的基因分型。其中D2S2382與D5S2115位點(diǎn)在該人群中的等位基因只有一種，無多態(tài)性。在1號(hào)染色體上的D1S214，4號(hào)染色體上的D4S392、D4S1535，7號(hào)染色體上的D7S513，患者組與患者父母組或正常對(duì)照組統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算的P值<0．01，差異有顯著性意義，顯示與孤獨(dú)癥存在關(guān)聯(lián)。 結(jié)論: 山東省人群的孤獨(dú)癥患者中在1p36