大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異的初步探討.pdf

1、咬合創(chuàng)傷是口腔臨床常見疾病之一，是由于咬合關(guān)系不正?；蛞Ш狭α坎粎f(xié)調(diào)，個(gè)別或某幾個(gè)牙所受的咬合力量超過其牙周組織的耐受力而造成的牙周組織損傷情況，咬合創(chuàng)傷嚴(yán)重者可導(dǎo)致牙槽骨的吸收，牙槽骨吸收是一個(gè)復(fù)雜的生物過程，涉及成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、成千上萬細(xì)胞因子及其構(gòu)成的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。對咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致骨吸收機(jī)制的研究是目前口腔醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)，其具體分子生物學(xué)機(jī)制目前尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)希望通過建立大鼠咬合創(chuàng)傷動(dòng)物模型，觀察咬

2、合創(chuàng)傷不同時(shí)間大鼠牙周組織破壞情況，并采用全功能組表達(dá)譜基因芯片技術(shù)對大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異進(jìn)行初步探討，進(jìn)一步明確咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致牙槽骨吸收的分子生物學(xué)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一咬合創(chuàng)傷對大鼠牙周組織的影響目的:研究不同作用時(shí)間咬合創(chuàng)傷對大鼠牙周組織的影響。方法:通過在大鼠右側(cè)上頜第一磨牙粘接鋼絲法建立同側(cè)下頜咬合創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，分別于24小時(shí)、3天、7天、14天后取該側(cè)下頜第一磨牙牙槽骨為實(shí)驗(yàn)組，以正常大鼠右側(cè)下頜第一磨牙為對照組，進(jìn)行

3、X線攝像觀察、HE染色、MMP-9免疫組織化學(xué)染色，采用單因素方差分析對免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:X線片顯示對照組骨小梁清晰，骨硬板連續(xù)完整，未見明顯骨吸收區(qū)。24h組、3天組、7天組未見明顯牙周膜增寬，14天組根尖區(qū)牙周膜明顯增寬。1
　　 HE染色結(jié)果顯示:隨著咬合創(chuàng)傷時(shí)間增加，牙周纖維出現(xiàn)斷裂、變性，多核細(xì)胞逐漸，出現(xiàn)骨吸收陷窩，且病變隨咬合創(chuàng)傷時(shí)間延長越來越顯著。
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示:咬合創(chuàng)

4、傷各組大鼠根周牙槽骨中均見MMP-9陽性染色細(xì)胞，且隨著咬合升高時(shí)間的延長，陽性細(xì)胞數(shù)目逐漸增多。MMP-9陽性染色細(xì)胞百分比24h組與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余各組與對照組相比皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 X線片、HE染色及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致大鼠牙周組織破壞，且破壞隨時(shí)間延長越來越嚴(yán)重。
　　 實(shí)驗(yàn)二大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異的基因芯片研究
　　 目的:
　　

5、 對大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異進(jìn)行初步探討，進(jìn)一步明確咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致牙槽骨吸收的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法:
　　 建立大鼠咬合創(chuàng)傷動(dòng)物模型，咬合創(chuàng)傷24h取大鼠雙側(cè)下頜牙槽骨組織，提取樣本總RNA進(jìn)行包括27000個(gè)基因在內(nèi)的全功能組表達(dá)譜基因芯片檢測，對差異表達(dá)基因進(jìn)行Pathway和GO分析，并選取代表性基因采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果:
　　 全

6、功能組表達(dá)譜基因芯片結(jié)果顯示，與對側(cè)牙槽骨組織相比咬合創(chuàng)傷側(cè)差異表達(dá)基因共有586個(gè)，其中表達(dá)增強(qiáng)166個(gè)，表達(dá)降低420個(gè)，Pathway分析涉及106個(gè)不同的信號(hào)通路，GO分析主要涉及270個(gè)不同的功能分類，RT-PCR驗(yàn)證與芯片結(jié)果一致。
　　 結(jié)論:
　　 通過芯片結(jié)果、Pathway及GO分析發(fā)現(xiàn):咬合創(chuàng)傷24h牙槽骨正常的骨平衡狀態(tài)已經(jīng)被打破，成骨細(xì)胞及相關(guān)的成骨活動(dòng)受到抑制，而此時(shí)破骨細(xì)胞活性及破骨現(xiàn)象增強(qiáng)