痹腫消湯對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織RhoA蛋白表達的影響.pdf

1、目的：通過實驗測定膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠滑膜組織中RhoA的表達，觀察痹腫消湯對CIA大鼠滑膜和軟骨損傷的保護作用，進一步探討該方抑制RA骨質(zhì)侵蝕的作用機理，為痹腫消湯治療RA提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、采用牛Ⅱ型膠原（bovineⅡ collgen，BIIC）混合完全弗氏佐劑（complete Freund’S adjuvant，CFA）皮下注射大鼠復(fù)制實驗性關(guān)節(jié)炎動物模型。模型成功后隨機分為兩組，

2、一組為痹腫消湯組（n=15，簡稱治療組），灌服BZXD，另一組為CIA模型組（n=15，簡稱模型組），灌服等劑量雙蒸水。正常對照組（簡稱正常組，n=15）大鼠每日灌服等劑量雙蒸水。
　　 2、觀察三組大鼠一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分、足爪腫脹度、病理形態(tài)學(xué)改變。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分別記錄大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分；每周測體重及足爪腫脹程度；在免疫后第30天、45天分批處死大鼠，用HE染色

3、法觀察各組踝關(guān)節(jié)病理形態(tài)學(xué)改變。
　　 3、免疫組化檢測模型組、治療組及正常組在不同時間點RhoA在關(guān)節(jié)滑膜中的表達，應(yīng)用計算機圖像分析系統(tǒng)計算滑膜中RhoA的灰度值，利用spssl1.0統(tǒng)計軟件包比較組間及組內(nèi)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1．CIA模型復(fù)制：采用BIIC混合CFA皮下注射SD大鼠成功復(fù)制CIA模型，成功率達90.0％。
　　 （1）一般情況觀察：模型組大鼠精神欠佳，飲食減少，平均體重較治

4、療組輕（P＜0.05），體毛欠光澤，后期可見毛發(fā)枯燥，治療組未見以上情況。模型組大鼠于免疫后第3周、第4周、第5周、第6周體重增長較正常組減輕（P＜0.05），第1周和第2周體重增長較正常組差異無顯著性（P＞O.05）；治療組大鼠于第4、5、6周體重增加較模型組明顯，差異有顯著性（P＜0.05），其余時間點與模型組比較差異不顯著。
　　 （2）關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分評定：CIA大鼠關(guān)節(jié)炎體征于免疫后6-8天開始出現(xiàn)。免疫后1Od，模型組

5、，治療組的關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分增加。模型組于免疫后25天關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分達到高峰，30天開始下降；治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分與模型組比較，在20天前無明顯區(qū)別，差異無顯著性（P＞O.05），兩組關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分于25天左右達高峰，但治療組低于模型組，差異有顯著性（P＜0.05）。BZXD治療兩周后，關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分開始下降。治療組大鼠AI積分于20天、25天、30天、35天、40天、45天均明顯低于模型組（P＜0.05）。
　　 （3）足爪腫

6、脹度測量：大鼠于免疫1周后足爪腫脹明顯，與正常組比較，差異有顯著性（P＜O.05）。治療組足爪腫脹度與模型組比較有減輕趨勢，免疫后第5周（即治療第3周）具有顯著性差異（P＜O.05）。
　　 （4）病理組織學(xué)觀察：正常大鼠滑膜組織未見明顯的新生血管及炎癥細胞浸潤，模型組30天有明顯血管增生、滑膜增厚，炎性細胞浸潤、水腫，隨著關(guān)節(jié)癥狀的加重，新生血管逐漸增多、血管擴張、充血，大量淋巴細胞浸潤。治療組滑膜組織可見少量新生血管及炎癥細

7、胞浸潤，滑膜輕度增厚，于45d后可見新生血管明顯減少，炎癥減輕，滑膜變薄。痹腫消湯能減輕CIA關(guān)節(jié)滑膜損傷。
　　 2、關(guān)節(jié)滑膜RhoA蛋白表達的檢測：
　　 免疫組化圖像分析顯示，模型組滑膜組織的RhoA表達灰度值明顯低于正常組，且30天表達高于45天表達；給藥后，治療組的滑膜組織RhoA表達灰度值明顯高于模型組；治療組45天RhoA表達灰度值高于30天表達。
　　 結(jié)論：
　　 1、以BIIC混合CF