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1、目的:通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠滑膜組織中RhoA的表達(dá),觀察痹腫消湯對(duì)CIA大鼠滑膜和軟骨損傷的保護(hù)作用,進(jìn)一步探討該方抑制RA骨質(zhì)侵蝕的作用機(jī)理,為痹腫消湯治療RA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
1、采用牛Ⅱ型膠原(bovineⅡ collgen,BIIC)混合完全弗氏佐劑(complete Freund’S adjuvant,CFA)皮下注射大鼠復(fù)制實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。模型成功后隨機(jī)分為兩組,
2、一組為痹腫消湯組(n=15,簡(jiǎn)稱(chēng)治療組),灌服BZXD,另一組為CIA模型組(n=15,簡(jiǎn)稱(chēng)模型組),灌服等劑量雙蒸水。正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組,n=15)大鼠每日灌服等劑量雙蒸水。
2、觀察三組大鼠一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分、足爪腫脹度、病理形態(tài)學(xué)改變。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分別記錄大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分;每周測(cè)體重及足爪腫脹程度;在免疫后第30天、45天分批處死大鼠,用HE染色
3、法觀察各組踝關(guān)節(jié)病理形態(tài)學(xué)改變。
3、免疫組化檢測(cè)模型組、治療組及正常組在不同時(shí)間點(diǎn)RhoA在關(guān)節(jié)滑膜中的表達(dá),應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算滑膜中RhoA的灰度值,利用spssl1.0統(tǒng)計(jì)軟件包比較組間及組內(nèi)差異。
結(jié)果:
1.CIA模型復(fù)制:采用BIIC混合CFA皮下注射SD大鼠成功復(fù)制CIA模型,成功率達(dá)90.0%。
(1)一般情況觀察:模型組大鼠精神欠佳,飲食減少,平均體重較治
4、療組輕(P<0.05),體毛欠光澤,后期可見(jiàn)毛發(fā)枯燥,治療組未見(jiàn)以上情況。模型組大鼠于免疫后第3周、第4周、第5周、第6周體重增長(zhǎng)較正常組減輕(P<0.05),第1周和第2周體重增長(zhǎng)較正常組差異無(wú)顯著性(P>O.05);治療組大鼠于第4、5、6周體重增加較模型組明顯,差異有顯著性(P<0.05),其余時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異不顯著。
(2)關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分評(píng)定:CIA大鼠關(guān)節(jié)炎體征于免疫后6-8天開(kāi)始出現(xiàn)。免疫后1Od,模型組
5、,治療組的關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分增加。模型組于免疫后25天關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分達(dá)到高峰,30天開(kāi)始下降;治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分與模型組比較,在20天前無(wú)明顯區(qū)別,差異無(wú)顯著性(P>O.05),兩組關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分于25天左右達(dá)高峰,但治療組低于模型組,差異有顯著性(P<0.05)。BZXD治療兩周后,關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分開(kāi)始下降。治療組大鼠AI積分于20天、25天、30天、35天、40天、45天均明顯低于模型組(P<0.05)。
(3)足爪腫
6、脹度測(cè)量:大鼠于免疫1周后足爪腫脹明顯,與正常組比較,差異有顯著性(P<O.05)。治療組足爪腫脹度與模型組比較有減輕趨勢(shì),免疫后第5周(即治療第3周)具有顯著性差異(P<O.05)。
(4)病理組織學(xué)觀察:正常大鼠滑膜組織未見(jiàn)明顯的新生血管及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),模型組30天有明顯血管增生、滑膜增厚,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫,隨著關(guān)節(jié)癥狀的加重,新生血管逐漸增多、血管擴(kuò)張、充血,大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。治療組滑膜組織可見(jiàn)少量新生血管及炎癥細(xì)
7、胞浸潤(rùn),滑膜輕度增厚,于45d后可見(jiàn)新生血管明顯減少,炎癥減輕,滑膜變薄。痹腫消湯能減輕CIA關(guān)節(jié)滑膜損傷。
2、關(guān)節(jié)滑膜RhoA蛋白表達(dá)的檢測(cè):
免疫組化圖像分析顯示,模型組滑膜組織的RhoA表達(dá)灰度值明顯低于正常組,且30天表達(dá)高于45天表達(dá);給藥后,治療組的滑膜組織RhoA表達(dá)灰度值明顯高于模型組;治療組45天RhoA表達(dá)灰度值高于30天表達(dá)。
結(jié)論:
1、以BIIC混合CF
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