痹腫消湯對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織RhoA蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠滑膜組織中RhoA的表達(dá)，觀察痹腫消湯對(duì)CIA大鼠滑膜和軟骨損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步探討該方抑制RA骨質(zhì)侵蝕的作用機(jī)理，為痹腫消湯治療RA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、采用牛Ⅱ型膠原（bovineⅡ collgen，BIIC）混合完全弗氏佐劑（complete Freund’S adjuvant，CFA）皮下注射大鼠復(fù)制實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。模型成功后隨機(jī)分為兩組，

2、一組為痹腫消湯組（n=15，簡(jiǎn)稱(chēng)治療組），灌服BZXD，另一組為CIA模型組（n=15，簡(jiǎn)稱(chēng)模型組），灌服等劑量雙蒸水。正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)正常組，n=15）大鼠每日灌服等劑量雙蒸水。
　　 2、觀察三組大鼠一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分、足爪腫脹度、病理形態(tài)學(xué)改變。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分別記錄大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分；每周測(cè)體重及足爪腫脹程度；在免疫后第30天、45天分批處死大鼠，用HE染色

3、法觀察各組踝關(guān)節(jié)病理形態(tài)學(xué)改變。
　　 3、免疫組化檢測(cè)模型組、治療組及正常組在不同時(shí)間點(diǎn)RhoA在關(guān)節(jié)滑膜中的表達(dá)，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算滑膜中RhoA的灰度值，利用spssl1.0統(tǒng)計(jì)軟件包比較組間及組內(nèi)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1．CIA模型復(fù)制：采用BIIC混合CFA皮下注射SD大鼠成功復(fù)制CIA模型，成功率達(dá)90.0％。
　　 （1）一般情況觀察：模型組大鼠精神欠佳，飲食減少，平均體重較治

4、療組輕（P＜0.05），體毛欠光澤，后期可見(jiàn)毛發(fā)枯燥，治療組未見(jiàn)以上情況。模型組大鼠于免疫后第3周、第4周、第5周、第6周體重增長(zhǎng)較正常組減輕（P＜0.05），第1周和第2周體重增長(zhǎng)較正常組差異無(wú)顯著性（P＞O.05）；治療組大鼠于第4、5、6周體重增加較模型組明顯，差異有顯著性（P＜0.05），其余時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異不顯著。
　　 （2）關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分評(píng)定：CIA大鼠關(guān)節(jié)炎體征于免疫后6-8天開(kāi)始出現(xiàn)。免疫后1Od，模型組

5、，治療組的關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分增加。模型組于免疫后25天關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分達(dá)到高峰，30天開(kāi)始下降；治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分與模型組比較，在20天前無(wú)明顯區(qū)別，差異無(wú)顯著性（P＞O.05），兩組關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分于25天左右達(dá)高峰，但治療組低于模型組，差異有顯著性（P＜0.05）。BZXD治療兩周后，關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分開(kāi)始下降。治療組大鼠AI積分于20天、25天、30天、35天、40天、45天均明顯低于模型組（P＜0.05）。
　　 （3）足爪腫

6、脹度測(cè)量：大鼠于免疫1周后足爪腫脹明顯，與正常組比較，差異有顯著性（P＜O.05）。治療組足爪腫脹度與模型組比較有減輕趨勢(shì)，免疫后第5周（即治療第3周）具有顯著性差異（P＜O.05）。
　　 （4）病理組織學(xué)觀察：正常大鼠滑膜組織未見(jiàn)明顯的新生血管及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，模型組30天有明顯血管增生、滑膜增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫，隨著關(guān)節(jié)癥狀的加重，新生血管逐漸增多、血管擴(kuò)張、充血，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。治療組滑膜組織可見(jiàn)少量新生血管及炎癥細(xì)

7、胞浸潤(rùn)，滑膜輕度增厚，于45d后可見(jiàn)新生血管明顯減少，炎癥減輕，滑膜變薄。痹腫消湯能減輕CIA關(guān)節(jié)滑膜損傷。
　　 2、關(guān)節(jié)滑膜RhoA蛋白表達(dá)的檢測(cè)：
　　 免疫組化圖像分析顯示，模型組滑膜組織的RhoA表達(dá)灰度值明顯低于正常組，且30天表達(dá)高于45天表達(dá)；給藥后，治療組的滑膜組織RhoA表達(dá)灰度值明顯高于模型組；治療組45天RhoA表達(dá)灰度值高于30天表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1、以BIIC混合CF