99Tc-MDP對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠PANKL-OPG系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的:
　　 建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen—induced arthritis,CIA)大鼠模型,通過(guò)檢測(cè)給藥前后血清和膝關(guān)節(jié)液核因子κB受體活化因子配體(recepter activator ofnuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)濃度,以及RANKL、OPG在膝關(guān)節(jié)滑膜組織的表達(dá),研究RANKL／OPG系統(tǒng)在CIA大鼠關(guān)節(jié)病變發(fā)生發(fā)展中的

2、作用。以空白組和模型組作對(duì)照,研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)和99锝[99Tc]-亞甲基二膦酸鹽(Technetium-99 tertiarydiphosphine,99Tc-MDP,商品名:云克)對(duì)CIA大鼠血清、膝關(guān)節(jié)液RANKL、OPG濃度和膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL和OPG表達(dá)的影響,探討MTX和99Tc-MDP的干預(yù)作用。
　　 方法:
　　 48只雄性Wistar大鼠隨機(jī)選取8只作為空白組,其余4

3、0只用于造模。造模大鼠自尾根部至背部皮下多點(diǎn)注射雞Ⅱ型膠原乳劑(0.5ml／只),一周后等量加強(qiáng)免疫；空白組皮下注射等量生理鹽水作對(duì)照。初次免疫后第28天進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index,AI)評(píng)分,選取24只AI評(píng)分≥6分大鼠隨機(jī)分為模型組、MTX組和99Tc-MDP組,每組8只。MTX組:尾靜脈注射MTX(2.4mg／(kg·w)),持續(xù)3周,給藥間歇內(nèi)每天尾靜脈注射等體積生理鹽水；99Tc-MDP組:尾靜脈注射99T

4、c-MDP(含99锝0.04μg／(kg·d)),持續(xù)3周;空白組及模型組每日尾靜脈注射同99Tc-MDP組等體積生理鹽水作對(duì)照,持續(xù)3周。給藥前及給藥后每周進(jìn)行一次AI評(píng)分及尾靜脈取血,給藥結(jié)束后留取左后肢膝關(guān)節(jié)液,采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)法測(cè)定大鼠血清及膝關(guān)節(jié)液RANKL、OPG濃度；留取右后肢膝關(guān)節(jié),脫鈣后行蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察膝關(guān)節(jié)滑膜、軟骨和骨病

5、理變化并計(jì)算病理評(píng)分,行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL和
　　 OPG表達(dá)；留取左后肢膝關(guān)節(jié)滑膜,蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測(cè)滑膜RANKL、OPG表達(dá)。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以(x)±s形式表示,用SPSS18.0軟件進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),組間比較采用采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1)40只大鼠用于造模,造模成功24只,成功率60％。
　　 2)給藥后

6、,MTX組和99Tc-MDP組關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。模型組和MTX組給藥后3周明顯高于給藥前(P<0.01)；99Tc-MDP組給藥后1周明顯低于給藥前(P<0.01)。
　　 3)給藥后MTX組和99Tc-MDP組大鼠血清RANKL、OPG濃度及比值明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。空白組給藥前后未見(jiàn)明顯變

7、化(P>0.05)；模型組和MTX組給藥后3周明顯高于給藥前(P<0.01)；99Tc-MDP組給藥后1周明顯低于給藥前(P<0.01)。
　　 4)給藥結(jié)束后,模型組、MTX組和99Tc-MDP組膝關(guān)節(jié)液RANKL、OPG濃度及RANKL／OPG比值明顯高于空白組(P<0.01)；MTX組和99Tc-MDP組明顯低于模型組(P<0.01)；99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 5)99Tc-MDP

8、組和MTX組膝關(guān)節(jié)病理評(píng)分明顯低于模型組(P<0.01)；99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 6)模型組、MTX組和99Tc-MDP組膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL、OPG表達(dá)以及二者半定量比值明顯高于空白組(P<0.01),MTX組和99Tc-MDP組明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.應(yīng)用完全弗氏佐劑乳化的雞Ⅱ型膠原乳劑可

9、成功誘導(dǎo)CIA大鼠模型。
　　 2.CIA大鼠血清和膝關(guān)節(jié)液RANKL、OPG濃度明顯升高,膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL、OPG表達(dá)明顯增強(qiáng),提示RANKL和OPG可能參與了CIA大鼠病變的發(fā)生發(fā)展,RANKL／OPG比值升高可能是CIA大鼠關(guān)節(jié)發(fā)生破壞的機(jī)制之一。
　　 3.MTX和99Tc-MDP均可降低血清及膝關(guān)節(jié)液RANKL和OPG濃度、抑制膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL和OPG表達(dá),提示二者可能通過(guò)降低RANKL／OPG比值達(dá)到

10、改善關(guān)節(jié)滑膜炎癥、軟骨和骨質(zhì)破壞的作用。
　　 4.99Tc—MDP組大鼠血清和膝關(guān)節(jié)液RANKL、OPG濃度及膝關(guān)節(jié)滑膜RANKL、OPG表達(dá)半定量結(jié)果明顯低于MTX組,結(jié)合關(guān)節(jié)炎指數(shù)和膝關(guān)節(jié)病理評(píng)分,認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)99Tc-MDP組療效優(yōu)于MTX組。
　　 5.99Tc-MDP組關(guān)節(jié)炎指數(shù)和血清RANKL、OPG濃度于給藥后1周開(kāi)始低于給藥前,MTX組給藥后3周仍高于給藥前,提示本實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)99Tc-MDP組起效時(shí)