白芍有效成分芍藥苷的UPLC法測定及其對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的影響.pdf

1、目的:
　　采用超高效液相色譜法對白芍有效成分芍藥苷的定量測定及白芍煎劑灌胃SD大鼠后吸收入血成分的定性測定，探討吸收入血成分對膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)大鼠的治療作用，尋找痹腫消湯治療RA的有效單體。
　　方法:
　　1.采用超高效液相色譜法測定白芍有效成分芍藥苷含量，色譜柱:(ACQUITY UPLC BEH C182.1×50mm Column,1.7μm)，流動相:乙腈(A)和1％醋酸水(B)，梯度洗脫，流速:

2、0.25mL/min，柱溫:40℃，檢測波長:190-480nm。繪制標準曲線，并對其精密度、回收率、樣本穩(wěn)定性和重復性進行驗證。
　　2.運用上述超高效液相色譜法對SD大鼠灌胃白芍煎劑后血漿中有效成分進行定性檢測。
　　3.采用牛Ⅱ型膠原混合弗氏佐劑誘導SD大鼠復制CIA動物模型，以芍藥苷標準品灌胃給藥干預，通過其對與RA發(fā)生發(fā)展密切相關的血清炎性細胞因子IL-1β、TNF-α含量的影響，從低、中、高劑量中篩選出芍藥苷治療

3、膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的最佳劑量，并對大鼠一般情況、體重增長變化、關節(jié)炎指數(shù)積分、足爪腫脹度、足爪影像學、關節(jié)滑膜病理學及血清IL-1β、TNF-α含量變化進行評估，探討芍藥苷對類風濕性關節(jié)炎模型的治療作用。
　　結(jié)果:
　　1.在5min內(nèi)，白芍有效成分芍藥苷獲得良好分離，測得白芍生藥中芍藥苷含量為0.73mg/g。芍藥苷在其檢測范圍內(nèi)線性關系良好，R2＞0.9993;日內(nèi)、日間精密度良好，其相對標準差(RSD)波動在0.9

4、8％-3.65％之間;白芍煎劑在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD＜2.64％;白芍煎劑重復性良好，RSD＜2.68％;芍藥苷的加樣回收率良好，加樣回收率在98.5％-103.5％之間，RSD＜2.7％。
　　2.灌胃白芍煎劑30min后，在SD大鼠血漿中成功檢測出活性物質(zhì)芍藥苷。
　　3.低、中、高不同劑量的芍藥苷能不同程度地下調(diào)CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平，中劑量效果更明顯。
　　4.以中劑量芍藥苷干預CIA

5、大鼠:①一般情況觀察:模型組大鼠精神委靡，飲食、活動減少，后期可見毛發(fā)枯燥等癥狀;治療組、正常組大鼠未見以上表現(xiàn)。②體重增長變化情況:模型組、治療組大鼠較正常組大鼠體重增長緩慢;治療3周后，治療組大鼠與模型組大鼠比較體重增長明顯(P＜0.01)。③關節(jié)炎指數(shù)評分:隨著病程延長，模型組、治療組大鼠關節(jié)炎指數(shù)積分逐漸增加，在第21天左右達到高峰;在第35天、42天時，治療組大鼠關節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P＜0.05)。④足爪腫脹度測量:模型

6、組大鼠足爪腫脹較正常組腫脹明顯(P＜0.05)，隨著病程延長，足爪腫脹度逐漸升高;治療2周后，治療組大鼠足爪腫脹度與模型組比較明顯減輕(P＜0.05)。⑤關節(jié)X線攝片觀察:免疫后14天左右，模型組大鼠踝關節(jié)軟組織腫脹明顯，隨著病程延長，出現(xiàn)足趾關節(jié)骨密度降低、明顯骨侵蝕病灶、關節(jié)間隙狹窄甚至消失等表現(xiàn)。治療4周后，治療組大鼠關節(jié)周圍組織腫脹程度明顯減輕，骨質(zhì)破壞程度不明顯。⑥滑膜病理學觀察:免疫后42天，模型組大鼠滑膜可見大量血管翳形成

7、、炎性細胞浸潤、滑膜增厚等病理特征;治療4周后，治療組可見少量新生血管及炎性細胞浸潤，滑膜輕度增厚。⑦血清IL-1β、TNF-α水平檢測:在第28天、42天時，模型組、治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平較正常組明顯升高(P＜0.01)，但治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明顯低于模型組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.建立了白芍有效成分芍藥苷經(jīng)胃吸收入血的UPLC檢測法。
　　2.低、中、高不同劑量的