DEL型紅細(xì)胞輸注RhD陰性患者抗-D抗體調(diào)查分析.pdf

1、目的:因?yàn)镈EL型紅細(xì)胞膜上的D抗原數(shù)量非常少,只有通過(guò)敏感的吸收放散試驗(yàn)才能檢出。近年來(lái),DEL的臨床輸血安全問(wèn)題受?chē)?guó)際關(guān)注,日本和韓國(guó)先后報(bào)道了“亞洲型”DEL導(dǎo)致RhD陰性患者產(chǎn)生的抗-D免疫反應(yīng)(初次和回憶反應(yīng)),國(guó)內(nèi)僅2001年觀察到1例真實(shí)RhD陰性患者輸注DEL紅細(xì)胞后產(chǎn)生抗-D同種抗體,但更多文獻(xiàn)報(bào)道真實(shí)RhD陰性患者在接受DEL供者紅細(xì)胞后沒(méi)有發(fā)生輸血反應(yīng),也未檢測(cè)到抗-D。追蹤臨床接受DEL紅細(xì)胞的RhD陰性患者20

2、例,觀察臨床輸血反應(yīng),檢測(cè)其血清中有無(wú)抗-D抗體的產(chǎn)生,探討DEL型個(gè)體弱表達(dá)D抗原的臨床免疫原性。
　　方法:
　　1.供者DEL紅細(xì)胞的篩查。RhD-DEL型是從血清學(xué)角度定義的,由IAT確認(rèn)的RhD陰性經(jīng)吸收-放散試驗(yàn)檢測(cè)為D抗原陽(yáng)性。對(duì)供者血細(xì)胞采用血型血清學(xué)檢測(cè),包括鹽水法、間接抗人球蛋白法、吸收放散試驗(yàn)篩選DEL型紅細(xì)胞。DEL紅細(xì)胞臨床相關(guān)的抗原主要有D、C、c、E和e等5種,可以采用相應(yīng)的單克隆抗血清來(lái)鑒定。

3、
　　2.輸注DEL型紅細(xì)胞的RhD陰性患者血型鑒定和抗-D抗體檢測(cè)。為了觀察DEL表達(dá)D抗原的免疫原性,追蹤臨床接受DEL紅細(xì)胞的RhD陰性患者,采集患者輸血后6個(gè)月內(nèi)的EDTA﹒K2抗凝血,共20例,男10例,女10例,年齡為14~78歲,平均38.75歲。對(duì)患者紅細(xì)胞采用血型血清學(xué)檢測(cè)(包括鹽水法、抗人球蛋白法、吸收放散試驗(yàn))和血型的分子生物學(xué)檢測(cè)。分子生物學(xué)檢測(cè)采用天根血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA,采用試劑盒Rea

4、dy gene Drag(inno-Trin Blood Group SSP)PCR-SSP擴(kuò)增,產(chǎn)物用2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),通過(guò)凝膠成像儀成像。對(duì)患者血清采用凝聚胺法、間接抗球蛋白試驗(yàn)和微柱凝膠法篩查不規(guī)則抗體,然后對(duì)篩查陽(yáng)性的標(biāo)本通過(guò)譜細(xì)胞進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定,并進(jìn)行效價(jià)滴定。
　　結(jié)果:1.2010年1月至2011年3月安徽省血液中心獻(xiàn)血者共檢測(cè)421例RhD確認(rèn)陰性標(biāo)本。吸收放散試驗(yàn)檢出DEL108例,比例為25.6%;R

5、hD真陰性313例,比例為74.4%。對(duì)108例DEL樣本進(jìn)行RhCcEe因子測(cè)定,結(jié)果顯示85.2%的樣本中含有C抗原。
　　2.20例患者紅細(xì)胞血清學(xué)檢測(cè)5例為DEL型,占25%;15例為RhD真陰性,占75%。PCR-SSP擴(kuò)增顯示5例DEL型都含有RhD基因(K409K)。5例DEL型患者無(wú)論男女都未檢測(cè)出抗-D抗體,抗-D抗體陽(yáng)性的患者都為RhD真陰性。
　　患者血清檢測(cè)出2例女性標(biāo)本不規(guī)則抗體為陽(yáng)性,效價(jià)分別為3

6、2和512,所有男性血清中都未發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。譜細(xì)胞鑒定不規(guī)則抗體都為抗-D抗體。其中1例為第一次輸血的妊娠女性,22歲,其兒子血樣 RhD為陽(yáng)性,提示母體內(nèi)抗體可能為妊娠引起;另1例女性,36歲,輸DEL紅細(xì)胞前后其血清抗-D抗體都為陽(yáng)性,調(diào)查其病歷發(fā)現(xiàn)生育史5次,曾于1997年產(chǎn)下一女?huà)?女孩健在,此次輸入DEL2u,也未發(fā)生輸血反應(yīng),輸血前后抗-D抗體效價(jià)都為512,膽紅素也未見(jiàn)明顯變化,輸血2周后出院。
　　結(jié)論:1.“亞

7、洲型”DEL表型個(gè)體通常為C抗原陽(yáng)性個(gè)體,C抗原可作為初篩“亞洲型”DEL的1個(gè)重要標(biāo)志。
　　2.在本次調(diào)查的20例樣本中,DEL型的個(gè)體未檢出抗-D抗體,產(chǎn)生抗-D抗體的個(gè)體未檢出DEL型,提示DEL個(gè)體可能不會(huì)被誘導(dǎo)產(chǎn)生同種免疫抗-D抗體。
　　3.本次調(diào)查所有男性RhD陰性患者接受DEL紅細(xì)胞后都未產(chǎn)生抗-D抗體,1例含有抗-D抗體的RhD真陰性女性接受DEL紅細(xì)胞后臨床也未出現(xiàn)輸血反應(yīng),提示DEL紅細(xì)胞導(dǎo)致RhD陰