1-甲基色氨酸對(duì)硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦干c-Fos蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過對(duì)SD(Sprague Dawley)大鼠預(yù)防性給予吲哚胺2,3一二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑1-甲基色氨酸(1-methyltryptophan,1-MT)觀察其對(duì)硝酸甘油誘導(dǎo)偏頭痛大鼠的行為學(xué)的改變及三叉神經(jīng)脊束核尾部(Caudal trigeminal nucleus,TNC)處c-Fos蛋白表達(dá)的影響,以初步探討IDO抑制劑對(duì)偏頭痛發(fā)作的防治作用及其可能的作用機(jī)制

2、。
　　 方法:
　　 1.30只大鼠按體重大小編號(hào),使用分層隨機(jī)法分為假模型組(8只)和模型組(22只),參照Tassorelli法制作實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠模型。模型組大鼠經(jīng)皮下注射硝酸甘油,當(dāng)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)兩耳發(fā)紅、前肢撓頭次數(shù)及爬籠次數(shù)增多等行為癥狀學(xué)表現(xiàn),則提示造模成功。用隨機(jī)法將模型組分為模型對(duì)照組(11只)和干預(yù)組(11只)。
　　 假模型組:經(jīng)胃灌注生理鹽水,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予生理

3、鹽水皮下注射。
　　 模型對(duì)照組:給予生理鹽水灌胃,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予硝酸甘油皮下注射,誘發(fā)偏頭痛。
　　 干預(yù)組:給予1-MT灌胃,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予皮下注射硝酸甘油,誘發(fā)偏頭痛。
　　 2.造模成功后即開始觀察大鼠行為學(xué)變化。主要包括以下內(nèi)容:①雙耳發(fā)紅:觀察并記錄偏頭痛大鼠兩耳發(fā)紅的起始和終止時(shí)間;②撓頭:觀察并記錄偏頭痛大鼠頻繁撓頭出現(xiàn)的起始和終止時(shí)

4、間,以大鼠出現(xiàn)連續(xù)撓頭次數(shù)達(dá)5次以上為撓頭出現(xiàn)時(shí)間標(biāo)準(zhǔn),以一個(gè)時(shí)間段中大鼠撓頭次數(shù)少于5次并出現(xiàn)倦怠和疲乏為撓頭消失時(shí)間標(biāo)準(zhǔn);⑨撓頭、爬籠次數(shù):從造模之時(shí)起,以30min作為一個(gè)時(shí)間段,采用持續(xù)時(shí)間分段計(jì)數(shù)的方法觀察每個(gè)時(shí)間段內(nèi)大鼠造模后撓頭、爬籠的次數(shù)。
　　 3.受試動(dòng)物于偏頭痛再次誘發(fā)后4h,腹腔注射麻醉、甲醛灌注,仰臥固定于腦立體定位儀上,自延髓閂部開始向尾部切取約4mm腦干組織。用免疫組化方法對(duì)c-Fos蛋白進(jìn)行染色,

5、然后用普通光學(xué)顯微鏡觀察c-Fos蛋白表達(dá)情況,并隨機(jī)選取5個(gè)視野,記錄陽性細(xì)胞數(shù)。
　　 結(jié)果
　　 1.行為學(xué)變化:假模型組大鼠皮下注射等量生理鹽水后,僅有個(gè)別大鼠出現(xiàn)次數(shù)很少的前肢搔頭,撓頭及爬籠。22只大鼠皮下注射硝酸甘油造模后4min左右均出現(xiàn)以上行為癥狀學(xué)表現(xiàn),與假模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05),此行為學(xué)癥狀持續(xù)約3h,繼而出現(xiàn)活動(dòng)減少、蜷臥。模型對(duì)照組大鼠第二次皮下注射硝酸甘油后大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)與造

6、模時(shí)的表現(xiàn)基本一致;干預(yù)組大鼠第二次皮下注射硝酸甘油后也出現(xiàn)耳紅、撓頭的現(xiàn)象,但其開始時(shí)間晚于模型組(n=22)及模型對(duì)照組(n=11),結(jié)束時(shí)間早于模型組及模型對(duì)照組,持續(xù)時(shí)間較模型組及模型對(duì)照組縮短;且撓頭及爬籠次數(shù)較模型組和模型對(duì)照組明顯減少,與模型組和模型對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.c-Fos蛋白表達(dá):光學(xué)顯微鏡下可見陽性細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為黃褐色,類圓形或卵圓形,核染為主,主要分布在三叉神經(jīng)脊束核尾核(TNC);

7、切片背景為無色或淡黃色,兩者易于區(qū)分。模型對(duì)照組較假模型組大鼠腦干標(biāo)本c-Fos免疫陽性細(xì)胞明顯增多(p＜0.05)。干預(yù)組大鼠腦干標(biāo)本c-Fos免疫陽性細(xì)胞也增多,但與模型對(duì)照組比較顯著減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)
　　 結(jié)論:
　　 l-MT可明顯改善偏頭痛大鼠的行為學(xué)變化,并能有效抑制其腦干TNC處c-Fos蛋白的表達(dá),說明抑制IDO的活性可能對(duì)偏頭痛發(fā)作具有防治作用。這一結(jié)果進(jìn)一步印證了犬尿氨酸通路可能與偏