PKC-,γ--NMDAR1在硝酸甘油致偏頭痛大鼠發(fā)病機制中的作用探討.pdf

1、偏頭痛是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）功能紊亂性疾病，嚴重影響患者生活質量和工作。目前偏頭痛的發(fā)病機制目前尚未完全明了。隨著神經(jīng)生物、分子藥理學的發(fā)展及腦成像技術的應用，中樞高敏感性在偏頭痛發(fā)作中的作用為人們所重視。目前有許多研究在脊髓水平上表明了外周炎癥性疼痛、神經(jīng)源性疼痛所致中樞高敏感性由PKC-NMDAR環(huán)路介導。 蛋白激酶C（PKC）為絲氨酸/蘇氨酸激酶大家族成員，是一類Ca2+

2、、磷脂依賴性磷酸化酶，作為一種胞內第二信使，PKC在神經(jīng)元興奮性的調制、信號傳導、神經(jīng)遞質的釋放、突觸可塑性等中起重要作用。其中PKCγ亞單位為腦、脊髓所獨有，在疼痛信號處理及中樞敏感化誘導和維持中起重要作用。 N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中興奮性遞質谷氨酸受體的一種類型，屬于離子型受體。NMDAR有NR1，NR2，NR3等三種亞單位，NMDAR是由NR1和NR2或NR3組成的異聚體，其中NR1是必需的

3、組分，NR2，NR3則修飾了整個受體的功能特性。它涉及了體內許多復雜的生理和病理過程，包括wind-up，中樞敏化、長時程增強、外周敏化和內臟疼痛、細胞壞死和凋亡，除此以外，還參與了痛覺過敏的產(chǎn)生和維持。 研究表明，當興奮性沖動傳來時，突觸前膜釋放大量的興奮性氨基酸（EAAs），使突觸后膜產(chǎn)生快EPSP，導致NMDAR通道內的阻止Ca2+內流的Mg2+移開，Ca2+得以內流，激活了胞內Ca2+依賴的PKC，促使PKC的膜轉位，磷

4、酸化胞膜上的NMDAR相關的離子通道，減少Mg2+對NMDAR通道的阻斷作用，最終使NMDAR活性增高、更多的Ca2+內流入胞，進一步增強PKC活性及其對NMDAR通道的效應，這一PKC-NMDAR正反饋環(huán)路在中樞敏感化中具有重要作用。 氟桂利嗪是一種長效的鈣離子拮抗劑，被公認為是預防偏頭痛的一線藥物。臨床雙盲對照研究表明，該藥可以有效減少偏頭痛發(fā)作的頻率及頭痛的嚴重程度，但氟桂利嗪預防偏頭痛發(fā)作的機制目前不明。 目的：

5、 本研究將從PKCγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1著手，首先建立硝酸甘油型實驗性偏頭痛大鼠模型，并同步設立生理鹽水對照組及氟桂利嗪干預組，檢測腦干組織中上述各物質mRNA及其蛋白的表達，并比較它們在發(fā)作期與間歇期的表達變化，以初步探討PKGγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1在偏頭痛發(fā)病機制中的作用。 方法 1.動物分組及處理：采用清潔級成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠為實驗對象，隨機分為3組

6、。模型組：依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油10mg/kg，每周1次，共5周，制作實驗性偏頭痛大鼠模型，并于第二次造模后給予生理鹽水10ml/kg/d灌胃，共4周；對照組：與模型組同步對照，以生理鹽水代替硝酸甘油皮下注射；干預組：自硝酸甘油第二次造模后，給予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃，共4周。 2.受試動物于第5次造模后2小時（發(fā)作期）或第4天（間歇期）分別斷頭處死，取大鼠腦干組織，液氮內保存。 3.RT-PCR

7、法半定量檢測大鼠腦干組織PKCγ、NMDAR1mRNA的表達。 4.Western-Blot法檢測大鼠腦干組織PKCγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1蛋白的表達。 結果 1.與對照組相比，在偏頭痛發(fā)作期及間歇期，模型組和干預組大鼠的腦干組織中PKCγmRNA及蛋白的表達無變化（p>0.05）； 2.與對照組相比，在偏頭痛發(fā)作期及間歇期，模型組和干預組大鼠的腦干組織中NMDAR1mRNA及非磷酸化蛋白的表

8、達無變化（p>0.05）； 3.與對照組相比，模型組磷酸化NMDAR1蛋白的表達明顯上調（p<0.05），干預組也稍有上調，但無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；模型組發(fā)作期與間歇期之間，干預組發(fā)作期和間歇期之間，磷酸化NMDAR1蛋白的表達均無明顯變化（p>0.05）。 結論 1、偏頭痛的發(fā)生發(fā)展可能與PKCγ依賴的磷酸化NMDAR1蛋白表達的上調有關。而可能與PKCγmRNA及蛋白、NMDAR1mRNA及蛋白（非磷