廣譜抗?。℅O）基因轉(zhuǎn)入水稻恢復(fù)系的研究.pdf

1、本研究通過有性雜交方式將葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，GO)基因從粳稻(OryzasativaL.ssp.japonica)日本晴(Nipponbare)轉(zhuǎn)入秈稻(O.sativassp.Indica)蜀恢162(shuhui162)，經(jīng)RT-PCR分子鑒定和淀粉-KI顯色反應(yīng)確定GO基因已導(dǎo)入秈稻蜀恢162。GO基因秈稻蜀恢162F1分別與樂恢188和縉恢21進行有性雜交。采用生理生化方法對GO基因秈稻蜀恢162F1及其

2、復(fù)交F1材料葉片進行過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)、超氧化物岐化酶(SOD)活性檢測和POD同工酶電泳分析。抗性鑒定稻瘟病菌誘發(fā)的GO基因蜀恢162F1及其復(fù)交F1。結(jié)果如下： (1)RT-PCR分子鑒定結(jié)果證明了有性雜交方式在水稻亞種間轉(zhuǎn)GO基因的可行性，GO基因已在分子水平整合和轉(zhuǎn)錄進蜀恢162基因組；淀粉-KI顯色反應(yīng)結(jié)果說明GO基因已在蛋白質(zhì)水平表達。 (2)無論是經(jīng)稻瘟病誘發(fā)的植株，還是未經(jīng)稻瘟病誘

3、發(fā)的植株，GO基因秈稻蜀恢162F1及其復(fù)交Fl材料葉片的POD、CAT、SOD活性均比對照提高；未感病植株材料葉片POD、CAT、SOD活性高于感病植株材料葉片；轉(zhuǎn)基因植株P(guān)OD同工酶電泳條帶顯色比非轉(zhuǎn)基因植株更深。說明GO基因已在秈稻蜀恢162F1中蛋白質(zhì)水平表達并發(fā)揮作用；GO基因已轉(zhuǎn)入復(fù)交F1材料并發(fā)揮抗病作用。 (3)葉瘟病抗性鑒定：轉(zhuǎn)基因秈稻蜀恢162F1抗性評價為中抗(MR)，而對照為高感(HS)。日本晴(GO)/

4、蜀恢162//樂恢188F1植株中有80％表現(xiàn)為抗(R)，而對照高感(HS)為79％。日本晴(GO)/蜀恢162//縉恢21F1植株中有78％為抗(R)，而對照中感(MS)為25％，感(S)為31％，高感(HS)為22％。經(jīng)DPS分析，除日本晴(GO)/蜀恢162//縉恢21F1植株中有1個株系外，其余株系均與對照存在顯著性差異關(guān)系。日本晴(GO)/蜀恢162//縉恢21F1的病情指數(shù)高于日本晴(GO)/蜀恢162//樂恢188F1的病