hTERT廣譜抗腫瘤基因疫苗實驗研究.pdf

1、背景與目的：
　　 人端粒酶逆轉錄酶（human telomerase reversetranscrip tase，hTERT）是端粒酶復合物的核心成分，其表達狀態(tài)是細胞調控端粒酶活性的重要環(huán)節(jié)。hTERT是最早發(fā)現，也是目前研究較多的廣譜腫瘤相關抗原（TAA）之一.已經證實在85％以上的人類惡性腫瘤細胞中均存在hTERT的再激活，并且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關鍵作用。hTERT的廣泛表達使其成為腫瘤治療的理想靶點.本研究通過

2、特異性擴增hTERT基因，成功構建了hTERT新型基因疫苗，并且建立了穩(wěn)定表達hTERT的B16細胞系。為進一步研究hTERT基因疫苗在腫瘤免疫治療中的應用奠定了研究基礎。
　　 方法：
　　 通過RT-PCR的方法從人前列腺癌細胞系PC-3M中特異性擴增hTERT基因，連接到真核表達載體pIRES-neo中，構建真核表達質粒pIRES-neo-hTERT.脂質體法瞬時轉染B16細胞，通過G418加壓篩選單克隆細胞系，用

3、western blot及免疫熒光和流式細胞術分別檢測B16細胞中hTERT基因的蛋白表達。
　　 擴增出hTERT基因片段eTERT（1609bp-2628bp），連接到真核表達載體pVAX1-IRES中，構建hTERT廣譜抗腫瘤基因疫苗pVAX1-eTERTFcGB，脂質體法瞬時轉染293T細胞，通過免疫熒光和流式細胞術檢測其表達情況.
　　 結果：
　　 特異性擴增得到大小與人hTERT基因相符的基因片段，

4、序列測定證實與GenBank上登錄的序列一致；成功構建真核表達質粒pIRES-neo-hTERT.質粒成功轉染B16細胞，經加壓篩選，得到穩(wěn)定表達hTERT的B16細胞系。
　　 成功擴增出hTERT基因片段eTERT（1609bp-2628bp），并構建hTERT廣譜抗腫瘤基因疫苗pVAX1-eTERTFcGB，流式細胞儀和免疫熒光的檢測結果顯示，重組基因疫苗質粒pVAX1-eTERTFcGB在293T細胞中得到很好的表達。<