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文檔簡(jiǎn)介
1、水稻是中國(guó)乃至世界上最重要的糧食作物之一,稻瘟病是世界范圍內(nèi)影響水稻生產(chǎn)最嚴(yán)重的真菌性病害。長(zhǎng)期的實(shí)踐表明,利用水稻自身的抗病免疫系統(tǒng),培育抗病水稻品種是防治稻瘟病最經(jīng)濟(jì)有效的方法。研究抗病基因的功能機(jī)制,以及不同抗病基因間的互補(bǔ)效應(yīng),對(duì)培育廣譜抗病品種有重要意義。本研究通過體外遺傳重組,在3個(gè)前人克隆的復(fù)等位抗病基因Pi9、Pi2和Piz-t的3’端分別融合了蛋白標(biāo)簽cMyc、AcV5以及HA序列,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別轉(zhuǎn)化并培育了攜
2、帶Pi9、Pi2-AcV5和Piz-t-CHA基因的水稻植株。進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行分析,主要結(jié)果如下:
1、分別構(gòu)建了載體pC1301-NBS2-Pi9-cMyc,pC1305-NBS4-Pi2-AcV5和pC2300-NBS2-Pi9-cMyc;分別得到56個(gè),54個(gè)和70個(gè)轉(zhuǎn)化克隆。
2、通過對(duì)轉(zhuǎn)基因后代的PCR檢測(cè)、GUS組織化學(xué)染色、Westernblotting檢測(cè)以及結(jié)合稻瘟菌接種實(shí)驗(yàn),獲得了攜帶Pi2
3、-AcV5基因且有抗病功能的轉(zhuǎn)基因植株,同時(shí)驗(yàn)證了前期創(chuàng)制的Piz-t-CHA純合株系。
3、采用常規(guī)雜交育種技術(shù)將含有Piz-t-CHA和Pi2-AcV5的T1代植株進(jìn)行有性雜交,結(jié)合PCR擴(kuò)增和Western blotting檢測(cè),獲得了同時(shí)攜帶Pi2-AcV5基因和Piz-t-CHA基因的雜種F1代植株,實(shí)現(xiàn)兩個(gè)等位抗性基因的聚合。
本研究創(chuàng)制的材料攜帶蛋白標(biāo)簽,這為從蛋白水平上研究抗病基因功能機(jī)制奠定了重要基
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