廣譜抗病hrp基因誘導型植物表達載體構建.pdf

1、本研究利用來源于歐文氏梨火疫病菌(Erwinia amylovora)能賦予植物對多種病原菌產生抗性的hrpN基因,并將其置于具有損傷和病原侵染誘導特性的Wun1啟動子和來源于金花菊(Flaveria bidentis)對啟動子具有顯著增強作用的Me1基因3'非翻譯區(qū)組成的高效調控元件下,旨在通過轉基因技術培育廣譜抗病馬鈴薯品種,以解決當前馬鈴薯抗病品種匱乏及現有抗病品種抗病譜窄的問題.目前,本研究完成的階段性工作有:1)Wun1啟動子

2、克隆.2)Me1 3'非翻譯區(qū)克隆.3)hrp基因亞克隆.4)GFP基因亞克隆.5)Wun1啟動子活性和Me1 3'非翻譯區(qū)增強作用鑒定,發(fā)現:轉化pBIWG和pBIWGM質粒DNA的材料中GFP的表達量明顯高于轉化pBIG和pBIGM質粒DNA的材料,證明Wun1啟動子具有較強的活性,同時Me1 3'非翻譯區(qū)也具有明顯的轉錄表達增強作用.6)hrp基因在微生物中表達:將hrp基因連接到原核表達載體pET28a(+)的T7啟動子和終止子

3、之間,構建成N端攜帶6×His標簽子的原核表達載體,通過IPTG誘導表達,提取表達產物,經SDS-PAGE電泳分析,得到了與推算的hrp基因表達產物分子質量(約42×10<'3>Da)相符的特異蛋白條帶.7)hrp基因植物表達載體構建:將目的基因與植物表達載體pBI121進行連接,構建了hrp基因植物表達載體pBIHM(CaMV 35S-hrp-Me1 3')和pBIWHM(Wun1-hrp-Me1 3').8)農桿菌工程菌的獲得:運用