強(qiáng)心甾類固醇(CTS)類藥物對(duì)血液腫瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 1.觀察強(qiáng)心苷類藥物(地高辛、洋地黃毒甙、哇巴因等)對(duì)常用血液腫瘤細(xì)胞株及正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　 2.初步探索強(qiáng)心苷抗腫瘤作用可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.培養(yǎng)血液腫瘤細(xì)胞株(Raji、NB4、Jurkat、RPMI8226、Kasumi-1)及正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞，培養(yǎng)基中分別加入不同濃度地高辛(2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、50

2、ng/ml)，哇巴因(0.1nM、1nM、20nM、50nM)，洋地黃毒甙(10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、50ng/ml)，干預(yù)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后，用CCK-8試劑盒檢測(cè)強(qiáng)心苷類藥物的細(xì)胞毒性并確定藥物作用IC50，選擇適當(dāng)?shù)乃幬餄舛冗M(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。
　　 2.根據(jù)CCK-8結(jié)果篩選藥物最適濃度，EdU流式細(xì)胞儀法檢測(cè)三種藥物最適濃度干預(yù)細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞增殖情況。
　　 3.EdU免疫熒光顯微

3、鏡觀察藥物干預(yù)最敏感細(xì)胞株48小時(shí)后細(xì)胞增殖情況。
　　 4.Annexin-V/PI雙染法檢測(cè)三種藥物最適濃度干預(yù)細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞凋亡情況。
　　 5.PI單染法檢測(cè)三種藥物最適濃度干預(yù)細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞周期情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.CCK-8結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，不同濃度地高辛、洋地黃、哇巴因分別作用細(xì)胞24、48、72小時(shí)后，對(duì)Raji、NB4、Jurkat、8226、Kasumi-1細(xì)胞

4、株具有不同程度抑制增殖的作用；上述藥物作用HL-60細(xì)胞株24小時(shí)，表現(xiàn)出輕微促增殖作用。
　　 2.三種藥物作用：Raji細(xì)胞48小時(shí)后，IC50分別為(地高辛：68.77±7.69nM、哇巴因：41.68±7.99nM、洋地黃毒甙：45.58±26.44nM)，而其它細(xì)胞株的IC50均在100nM左右。
　　 3.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml作用于Raji細(xì)胞株48小時(shí)后，可明顯抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)

5、胞凋亡、改變細(xì)胞周期分布：1)總凋亡率較空白對(duì)照組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；2)EdU流式細(xì)胞儀法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)處于增殖階段的細(xì)胞占總細(xì)胞的比率下降，與對(duì)照組相比有顯著性差異(p<0.05)；EdU熒光顯微鏡檢測(cè)處理組熒光強(qiáng)度減弱；3)與對(duì)照組相比，處于S期的細(xì)胞較對(duì)照組為少(p<0.05)，而處于G2/M期細(xì)胞比率顯著增高(p<0.05)，說(shuō)明細(xì)胞周期被阻滯在G2/M期。哇巴因20nM對(duì)本研究中所用所有細(xì)胞株無(wú)抑制增殖、促進(jìn)

6、凋亡作用，哇巴因50nM可抑制Raji細(xì)胞株增殖。
　　 4.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml、哇巴因20nM作用于其它腫瘤細(xì)胞株(Jurkat，HL-60，Kasumi-1，NB4，RPMI8226)及原代培養(yǎng)的正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞48小時(shí)后，檢測(cè)細(xì)胞增殖率、總凋亡率、細(xì)胞周期分布情況，強(qiáng)心苷組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(p>0.05)。尚未能獲得三種藥物作用于正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞的IC50值。
　　 結(jié)論

7、：
　　 1.本試驗(yàn)所用強(qiáng)心苷類藥物可抑制體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞株增殖。
　　 2.相對(duì)于其它腫瘤細(xì)胞株，Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞株對(duì)地高辛、洋地黃、哇巴因的敏感性最高。
　　 3.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml、哇巴因20nM不影響正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期分布。
　　 4.洋地黃毒甙等強(qiáng)心苷類藥物可抑制腫瘤細(xì)胞株增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞周期阻滯在G2/M