siRNA沉默泛素特異性肽酶22基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖的抑制作用.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分:泛素特異性肽酶22在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義
　　目的:研究胃癌組織中泛素特異性肽酶22(USP22)的表達(dá)及意義。
　　方法:使用免疫組化 SABC法檢測(cè)146例標(biāo)本(100例胃癌、46例癌旁正常組織)中USP22的表達(dá)情況,并將表達(dá)情況與病例的臨床病例資料相聯(lián)系。
　　結(jié)果:胃癌組織中USP22的陽(yáng)性率為80％,陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常組織。胃癌的分期與陽(yáng)性表達(dá)呈

2、正相關(guān),胃癌的分化程度與陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:USP22可能是胃癌新的分子標(biāo)志物。
　　第二部分:SiRNA沉默 USP22基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖的抑制作用
　　目的:研究胃癌細(xì)胞中沉默泛素特異性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22, USP22)的表達(dá)后其增殖的影響。
　　方法:設(shè)計(jì)三條 siRNA及陰性 siRNA針對(duì) USP22基因,采用脂質(zhì)體 Lipofectamin

3、e2000轉(zhuǎn)染胃癌 AGS細(xì)胞,Realtime-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后 AGS細(xì)胞中USP22 mRNA表達(dá)水平;Western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后 AGS細(xì)胞中USP22蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化情況;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布變化;采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖率及抑制率。
　　結(jié)果:在轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,三段干擾的片段都能分別在 mRNA和蛋白水平上有效的抑制USP22的表達(dá),其中轉(zhuǎn)染 USP22 siRNA3后效果最明顯,USP22的m