云南麗江地區(qū)納西族6-12歲兒童HBV感染調(diào)查及HBV基因型亞型鑒定.pdf

1、目的：（1）比較巢式PCR—RFLP和多重PCR兩法在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）基因型和亞型分型方法的特異性和敏感性，確定HBV基因型亞型分型法。（2）對云南麗江地區(qū)納西族6—12歲兒童的HBV感染進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查，并應(yīng)用已建立的方法鑒定納西族兒童HBV基因型及亞型的研究。 方法：采用型特異性引物的巢式PCR—RFLP法和六種主要的HBV型特異性引物及亞型特異性引物的多重PCR法分別檢測100

2、份慢性HBV感染的病人血清，確定HBV基因型和亞型的分型方法。應(yīng)用酶聯(lián)吸附免疫法（ELISA法）檢測納西族兒童血清標(biāo)本HBV的感染情況，并應(yīng)用已確定的型特異性引物巢式PCR結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長度多態(tài)性法（PCR—RFLP）對感染者基因型及亞型分型鑒定，并進(jìn)行測序。 結(jié)果：（1）確定HBV基因型和亞型的分型方法：兩法符合率僅50%（27/54），不一致率為50%（27/54）。②型特異性引物巢式PCR—RFLP法檢測出B

3、基因型41例（41%），C基因型25例（25%）．B+C基因型34例（34%），Bj亞型3例（7．3%），Ba亞型為38例（92．7%），Cs亞型為21例（84%），Ce亞型為3例（12%），1例c型未分出亞型（4%）。多重PCR法檢出B型18例（33．3%），C型7例（13%），B+C混和型5例（9．3%），B2亞型2例（11%），C1亞型2例（28．5%）。巢式PCR—RFLP法型檢出率100%亞型檢出率98．5%，多重PCR法型檢

4、出率55．6%，亞型檢出率僅為16%，前者高于后者（P<0．05）。（2）麗江納西族兒童HBV感染的調(diào)查研究及HBV基因型亞型的鑒定：①HBV流行率為39．6%（139/351），其中HBsAg陽性率最低為1．7%（6/351），抗—HBs陽性率為30．5%（107/351），全陰性率最高為60．4%；②男生、女生HBsAg陽性樣本各3例，抗—HBs陽性率男、女生分別為35．1%、29．9%，全陰性率男、女生分別為57．5%、63．3%

5、。性別之間分布x2=8．333，P>0．05，無統(tǒng)計學(xué)意義；③HBV流行率從6歲開始隨年齡增長呈上升趨勢，9、10歲人群HBV流行率達(dá)到峰值（51．6%，51．4%），隨后逐漸遞減，12歲達(dá)到最低點（22．2%），不同年齡段HBV流行率x2=13．1，P<0．05，有統(tǒng)計學(xué)意義。④不同年齡段不同HBV血清標(biāo)志物（HBV markers，HBVM）分布，x2=75．218，P>0．05，無統(tǒng)計學(xué)意義。⑤巢式PCR—RFLP檢出2例B基因型

6、均為Ba亞型，1例B+C型中分出Ce亞型，無B亞型分出。分型的樣本均為大三陽。 結(jié)論：（1）巢式PCR—RFLP鑒定HBV基因型及亞型較多重PCR敏感性高，重復(fù)性好。（2）麗江納西族兒童血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示HBV感染呈現(xiàn)出低感染的特征。（3）麗江納西族兒童HBV流行率與年齡有關(guān)；HBV感染血清學(xué)標(biāo)志分布與兒童的性別和年齡無關(guān)。（4）在對樣本進(jìn)行HBVM檢測初篩的基礎(chǔ)上，進(jìn)行巢式PCR—RFLP HBV基因型及亞型分型，結(jié)果2