黃芪多糖對(duì)P53基因介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)與胃癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、P53是重要的腫瘤抑制基因，經(jīng)研究表明，在人類(lèi)50％以上的腫瘤組織中p53基因均有不同程度的突變，目前遺傳學(xué)認(rèn)為其可能是腫瘤中最常見(jiàn)的遺傳學(xué)改變，說(shuō)明該基因的改變很可能是人類(lèi)腫瘤產(chǎn)生的主要發(fā)病因素。由p53介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生命活動(dòng)中起重要作用，但其與細(xì)胞內(nèi)其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間的聯(lián)系相當(dāng)復(fù)雜。本次實(shí)驗(yàn)主要采用裸鼠模型將SGC-7901人胃癌細(xì)胞直接接種，再予以黃芪多糖治療，觀察黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤

2、裸鼠的體重、體積、抑瘤率等多方面的作用;同時(shí)檢測(cè)P53下游Bcl2/Bax、Fas/FasL表達(dá)及PTEN、NF-κ B、CDX2基因表達(dá)的結(jié)果。找出黃芪多糖對(duì)P53基因介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)與胃癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。最后采用體外培養(yǎng)SGC-7901人胃癌細(xì)胞，采用MTT，觀察SGC-7901人胃癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期在黃芪多糖的作用下有什么變化。
　　第一部分黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤裸鼠的影響
　　第一節(jié)人胃癌細(xì)

3、胞SGC-7901的培養(yǎng)與收集
　　采用常規(guī)培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞SGC-7901，隨后對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，制成單細(xì)胞懸液，在臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)下將細(xì)胞濃度調(diào)整至1.0×108/ml。通過(guò)上述方法即可得到本實(shí)驗(yàn)所需的人胃癌細(xì)胞SGC-7901單細(xì)胞懸液。最后收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901人胃癌細(xì)胞，制備成相應(yīng)濃度的單細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)移至裸鼠。
　　第二節(jié)黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤裸鼠的體重、腫瘤體積、

4、抑瘤率以及病理學(xué)檢查結(jié)果的影響
　　對(duì)裸鼠使用培養(yǎng)后的SGC-7901人胃癌細(xì)胞進(jìn)行接種，得到荷瘤裸鼠。將其隨機(jī)分為模型組、黃芪多糖高劑量組、5-FU和黃芪多糖低劑量組，于治療開(kāi)始第0、7、14、21、28天分別稱(chēng)量裸鼠體重，測(cè)量腫瘤體積;停藥后將裸鼠處死，將瘤組織剝離后稱(chēng)取瘤重，并計(jì)算其抑瘤率;結(jié)果顯示模型組裸鼠體重增長(zhǎng)明顯，給予黃芪多糖干預(yù)后，體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，氟尿嘧啶組裸鼠體重明顯降低，與模型組相比具有顯著性差異;模型組

5、裸鼠腫瘤體積與重量明顯增大，黃芪多糖高、低劑量組與氟尿嘧啶組裸鼠腫瘤增長(zhǎng)緩慢，體積與重量減小較為明顯，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性差異;病理學(xué)檢查結(jié)果顯示模型組見(jiàn)多量腫瘤細(xì)胞彌漫性生長(zhǎng)，瘤細(xì)胞大小不均一，形成明顯的結(jié)節(jié)狀，核大而濃染，核異型性明顯，散在的瘤細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死，黃芪多糖干預(yù)治療后，瘤結(jié)節(jié)體積縮小，結(jié)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)少量的壞死，殘存的腫瘤細(xì)胞減少，與實(shí)驗(yàn)組比較有明顯好轉(zhuǎn)。綜上，我們可明顯發(fā)現(xiàn)黃芪多糖能夠抑制SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤的生

6、長(zhǎng)。
　　第三節(jié)黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤組織中P53下游基因表達(dá)的影響
　　采用體外培養(yǎng)的SGC-7901人胃癌細(xì)胞制作荷瘤裸鼠，用免疫組化法觀察黃芪多糖對(duì)SGC-7901細(xì)胞移植瘤組織中Bcl2/Bax、Fas/Fasl及PTEN、NF-κB、CDX2表達(dá)的影響，探究黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞移植瘤的抑制效應(yīng)及機(jī)制。經(jīng)檢測(cè)表明黃芪多糖對(duì)SGC-7901細(xì)胞移植瘤具有明顯的抑制作用，其機(jī)制可能與下

7、調(diào)Bcl2/Bax和上調(diào)Fas/Fasl有關(guān)，同時(shí)APS可上調(diào)PTEN、CDX2表達(dá)和下調(diào)NF-κ B(p65)的表達(dá)，提示黃芪多糖可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。
　　第二部分黃芪多糖對(duì)SGC-7901人胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、周期的影響
　　在體外培養(yǎng)SGC-7901人胃癌細(xì)胞，給予不用濃度、在不同時(shí)間采用黃芪多糖干預(yù)，用MTT、流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示SGC-7901人胃癌細(xì)胞早期凋亡、晚期凋亡的細(xì)胞增多，提示黃芪多糖