線粒體蛋白QCR2降解p53促進腫瘤發(fā)生發(fā)展.pdf

1、目的:目前為止,p53仍然是作用最為廣泛和最為重要的抑癌基因[1].有超過一半的惡性腫瘤(宮頸癌等)中發(fā)生有 p53的功能失活或者蛋白量降低[2-4].作為轉錄因子，p53能夠調控很多基因的表達水平，如p21，Bax等[5],進而調控細胞在多方面的生物學行為，如增殖，轉移，代謝等。深入挖掘調控p53的機制和重建p53蛋白的功能活性，仍然是目前全世界最為關注的課題之一。p53可以通過調控相關基因表達來調控細胞內線粒體數(shù)量與代謝活性[6]，

2、但是目前仍然沒有足夠的證據(jù)能夠證實線粒體蛋白能夠影響p53的狀態(tài)。而在我們前期研究中，發(fā)現(xiàn)線粒體蛋白UQCRC2(QCR2)參與調控了腫瘤細胞的TSA化療敏感性[7]。QCR2是線粒體氧化磷酸化復合體三的重要組成部分?，F(xiàn)在尚未有足夠的證據(jù)證實QCR2的表達水平與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的關系。本文主要從我們發(fā)現(xiàn)的QCR2對p53蛋白穩(wěn)定性的調控作用這一方向入手，探索線粒體蛋白QCR2在腫瘤中所扮演的角色。
　　方法：免疫組織化學證實 QC

3、R2在多種腫瘤組織中高表達，CCK8細胞活力檢測，EDU細胞增殖檢測，細胞克隆形成探索 QCR2對腫瘤細胞增殖的影響。流式細胞術檢測周期檢測QCR2對周期的影響。Western Blot證實QCR2調控p53蛋白水平,實時熒光定量PCR法證實QCR2水平對p53的mRNA水平不具有調控作用，蛋白免疫共沉淀方法研究p53的泛素化水平和尋找QCR2的相互作用蛋白以探索QCR2調控p53蛋白水平的機制，質譜鑒定QCR2相互作用蛋白。Nod-S

4、cid小鼠皮下成瘤實驗研究QCR2及PHB對腫瘤細胞成瘤能力的影響。
　　結果：QCR2在肺癌組織、肝癌組織、乳腺癌組織、甲狀腺癌組織、宮頸癌組織、食管癌組織、前列腺癌組織中的表達量都較相對應的正常組織高。下調 QCR2表達后腫瘤細胞發(fā)生G0/G1期阻滯，腫瘤細胞增殖變慢。而干擾QCR2后p53及其下游p21的蛋白量呈現(xiàn)明顯累積。后期實驗證實QCR2能夠促進p53泛素化，進而負向調控p53蛋白水平。p21作為p53的下游，也隨之變

5、化。經(jīng)證實，QCR2是通過調控PHB入核及PHB與p53的相互作用來調控p53的蛋白水平的。皮下成瘤實驗證明QCR2能夠促進腫瘤生長而PHB能夠抑制腫瘤生長。而大量宮頸癌標本的免疫組化染色證實QCR2的表達量與p21的表達量成負相關，而PHB的表達量與p21的表達量成正相關。
　　結論：
　　1.作為線粒體復合體三的重要組成蛋白，QCR2在多種腫瘤組織中表達量增高。
　　2. QCR2能夠促進p53泛素化，從而負向調控