利用基因突變技術進行安普霉素單組分產生菌的選育.pdf

1、黑暗鏈霉菌H6(Streptomyces tenebrarius H6)產生三種抗生素：安普霉素、氨甲酰妥布霉素和少量氨甲?？敲顾谺。多年來科研人員對黑暗鏈霉菌的研究主要集中于常規(guī)誘變育種和優(yōu)化生產工藝等方面，雖然取得一些好的進展，但對其抗生素合成的途徑了解較少。二十世紀八十年代興起的鏈霉菌基因工程研究，已在抗生素生物合成基因的克隆、產量提高、組分改善及雜合抗生素產生等方面取得長足的進步。為獲得黑暗鏈霉菌H6安普霉素單組分產生菌，對黑

2、暗鏈霉菌H6染色體上的tacA基因進行基因進行阻斷實驗，利用基因突變技術來選育安普霉素單組分產生菌。 利用PCR分別獲得tacA基因內部523bp片段和1063bp片段，將兩片段重新連接到pIJ2925內。在構建好的質粒中加入xy/E報告基因和ermE基因做為篩選標記，構建基因阻斷穿梭載體。轉化到大腸桿菌DH-5α。經接合轉移導入黑暗鏈霉菌H6，篩選雙交換阻斷變株。經發(fā)酵產物分析，阻斷變株不再合成氨甲酰妥布霉素，只合成安普霉素。