hMIC-1抗體的研制、鑒定及胰腺癌患者血清中MIC-1升高的臨床價值.pdf

1、目的：制備人巨噬細(xì)胞抑制因子-1(hMIC-1)的單克隆抗體與多克隆抗體，為建立MIC-1免疫學(xué)檢測方法和功能研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法：以酵母表達(dá)的hMIC-1重組蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠，通過傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)制備抗hMIC-1單克隆抗體，采用間接ELISA和Western blot等方法鑒定抗體的亞類、特異性等特性。采用免疫組織化學(xué)等常規(guī)檢測方法進一步檢驗抗體的特異性及可能的用途。此外，將hMIC-1重組抗原經(jīng)多次多點

2、免疫新西蘭大耳白兔，制備得到兔抗hMIC-1抗血清，純化后鑒定抗體的特異性，并初步探索建立ELISA檢測方法的可行性。 結(jié)果：獲得1株可穩(wěn)定分泌抗hMIC-1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為2G7。Western blot鑒定表明2G7單抗能夠特異識別重組hMIC-1及人結(jié)腸組織表達(dá)的還原型與非還原型MIC-1，與酵母粗提取物無交叉反應(yīng)。應(yīng)用2G7抗體免疫組化檢測MIC-1在結(jié)腸癌、前列腺癌表達(dá)情況，結(jié)果表明MIC-1分布于細(xì)胞

3、漿，呈強陽性著色，與商售MIC-1單抗相一致。應(yīng)用2G7抗體的免疫組化片背景更低，顯示出2G7抗體具有較好的特異性。兔抗重組hMIC-1多克隆抗體能夠識別天然hMIC-1，血清抗體效價為105，但不能與2G7單抗配對檢測hMIC-1。 結(jié)論：以酵母表達(dá)的重組hMIC-1作為免疫原能夠用于制備抗hMIC-1單克隆抗體雜交瘤。本研究獲得了1株針對hMIC-1的單克隆抗體瘤株，產(chǎn)生的抗體能應(yīng)用于hMIC-1 Western bolt檢