野油菜黃單胞菌控制hrpG、hrpX表達(dá)的調(diào)節(jié)基因的鑒定.pdf

1、hrp基因決定著病原細(xì)菌對(duì)寄主植物的致病性和誘導(dǎo)非寄主植物過(guò)敏反應(yīng)。在野油菜黃單胞菌致病變種(Xcc)中，hrpG、hrpX是目前已鑒定出的控制hrp基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因，而關(guān)于hrpG、hrpX上游的調(diào)節(jié)基因幾乎一無(wú)所知，因此，鑒定控制hrpG、hrpX表達(dá)的調(diào)節(jié)基因，對(duì)于研究hrp基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，揭示植物病原細(xì)菌的致病機(jī)制都具有重要意義。 本研究利用蔗糖敏感型自殺基因sacB作為報(bào)告基因，將報(bào)告質(zhì)粒pL6sacBhrp

2、X和pL6sacBhrpG通過(guò)三親本接合的方法導(dǎo)入Xcc 8004功能注釋為調(diào)節(jié)基因的253個(gè)突變體，從中篩選出6個(gè)候選調(diào)節(jié)基因XC3799、XC2253、XC3056、XC1734、XC2650和XC2251。 在初步獲得6個(gè)候選調(diào)節(jié)基因的基礎(chǔ)上，本研究又利用gus基因作為報(bào)告基因，建立了GUS報(bào)告系統(tǒng)加以驗(yàn)證。首先構(gòu)建獲得GUS報(bào)告質(zhì)粒pL6gushrpX和pL6gushrpG，然后將它們與另外兩個(gè)GUS報(bào)告質(zhì)粒pLGX和p

3、LGG通過(guò)三親本接合的方法分別導(dǎo)入上述候選基因?qū)?yīng)的突變體(073G12、125H08、151D11、NK1668、PK2558和NK2168)，在MMX培養(yǎng)基中檢測(cè)GUS活性。結(jié)果顯示，與野生型Xcc 8004相比，突變體073G12、125H08、151D11、NK1668和NK2168中hrpG、hrpX基因的表達(dá)量(即GUS活性)均表現(xiàn)為顯著降低，表明這5個(gè)突變體所對(duì)應(yīng)的基因XC3799、XC2253、XC3056、XC1734

4、和XC2251正向調(diào)控hrpG、hrpX基因的表達(dá)，而突變體PK2558對(duì)應(yīng)的基因XC2650非正向調(diào)控hrpG、hrpX基因的表達(dá)。通過(guò)功能反式互補(bǔ)，構(gòu)建獲得調(diào)節(jié)基因XC2253的突變體125H08和XC3056的突變體151D11的互補(bǔ)菌株，然后進(jìn)行突變體及互補(bǔ)菌株的表型檢測(cè)。結(jié)果表明，XC2253和XC3056這兩個(gè)調(diào)節(jié)基因都可影響Xcc的致病能力，但基本上不影響Xcc誘導(dǎo)辣椒ECW-10R的過(guò)敏反應(yīng)，也不影響Xcc胞外多糖的分泌