家族性腺瘤性息肉病APC基因突變分析.pdf

1、家族性腺瘤性息肉病（familial adenomatous polyposis,FAP）是以結(jié)直腸內(nèi)生長(zhǎng)大量腺瘤性息肉為主要特征的一種常染色體顯性遺傳病。根據(jù)大腸息肉數(shù)和發(fā)病年齡可分為息肉數(shù)多于100枚，具有較早發(fā)病年齡的經(jīng)典型家族性腺瘤性息肉?。╟lassical familial adenomatous polyposis,CFAP）和息肉數(shù)少于100枚，具有較晚發(fā)病年齡的輕表型家族性腺瘤性息肉?。╝ttenuated famil

2、ial adenomatous polyposis,AFAP）。FAP主要由腺瘤性息肉病基因（adenomatous polyposiscoli,APC）突變所致，該基因定位于染色體5q21-22，長(zhǎng)108kb，共有15個(gè)外顯子，其中15號(hào)外顯子占編碼序列的77％，基因共編碼含2843個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。APC蛋白具有和多種蛋白結(jié)合的位點(diǎn)，在負(fù)性調(diào)控Wnt/β-連環(huán)蛋白通路從而抑制結(jié)直腸腫瘤形成中起重要作用，APC蛋白通過(guò)下調(diào)β-連環(huán)

3、蛋白，阻止其過(guò)多進(jìn)入細(xì)胞核，若APC功能喪失，β-連環(huán)蛋白將在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)堆積，并過(guò)多轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核促進(jìn)癌基因表達(dá)。80-90%CFAP患者攜帶APC基因突變，其中大部分為無(wú)義突變和移碼突變，其余還包括大片段缺失/重復(fù)，剪接位點(diǎn)處突變等，這些突變導(dǎo)致功能有缺陷的蛋白形成，從而引起疾病發(fā)生。
　　本研究從DNA途徑，對(duì)6個(gè)通過(guò)臨床資料分析符合CFAP臨床診斷的家系進(jìn)行分子診斷，分34個(gè)片段擴(kuò)增APC基因的15個(gè)外顯子并對(duì)其PCR產(chǎn)物進(jìn)行直

4、接測(cè)序，結(jié)果顯示6個(gè)CFAP家系患者均存在APC基因突變，其中家系1在APC基因15號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性突變：c.2891T＞G（L964X），此突變導(dǎo)致密碼子964處由亮氨酸密碼子變?yōu)榻K止密碼子；家系2在APC基因15號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性突變：c.4012C＞T（Q1338X），此突變?cè)斐擅艽a子1338處由谷氨酰胺密碼子變?yōu)榻K止密碼子；家系3在APC基因8號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性突變：c.904C＞T（R302 X），此突變?cè)斐擅艽a子302處由

5、精氨酸密碼子變?yōu)榻K止密碼子；家系4在APC基因15號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性缺失突變：c.3927_3931delAAAGA，此突變?cè)斐蓧A基從密碼子1309處出現(xiàn)移碼，在密碼子1312處形成終止密碼子；家系5在APC基因15號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性缺失突變：c.2154_2157delGAAA，此突變?cè)斐蓧A基從密碼子690處出現(xiàn)移碼，在密碼子716處形成終止密碼子；家系6在APC基因6號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)雜合性突變：c.646C＞T（R216X），此突變?cè)斐?/p>

6、密碼子216處由精氨酸密碼子變?yōu)榻K止密碼子。上述6個(gè)家系A(chǔ)PC基因突變均導(dǎo)致終止密碼子提前出現(xiàn)，從而形成功能障礙的截短蛋白。通過(guò)人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)(The Human Gene Mutation Database,HGMD)查詢，家系1：c.2891T＞G（L964X）和家系5：c.2154_2157delGAAA突變尚未見報(bào)道，為新的突變，其余在HGMD中均有記錄，為已知突變。
　　通過(guò)分子診斷，對(duì)FAP患者及其家庭成員進(jìn)行AP