出血性大腸桿菌O157：H7基因芯片篩查結(jié)果分析、驗證及對其O50島功能的初步探討.pdf

1、腸出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)是一種腸道致病菌，1983年，Riley在美國Michigan和Oregon的一起出血性腸炎暴發(fā)中首次分離到，同年由Karmali等人分離得到O157：H7血清型。O157：H7主要通過食用被污染的食物傳染，它可造成腎功能不全，溶血性尿毒綜合征(HUS)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)，個別患者可因急性和慢性腎功能衰竭而死亡。近年來，由于新發(fā)現(xiàn)的病原微生物和

2、重新抬頭的病原微生物導(dǎo)致的傳染病是衛(wèi)生界關(guān)注的重大問題，微生物進(jìn)化是導(dǎo)致新的病原體出現(xiàn)的內(nèi)在因素。在細(xì)菌進(jìn)化過程中既可以獲得對抗生素的耐藥性或毒力，也可以缺失一部分基因增強(qiáng)生命力，由弱毒菌變成強(qiáng)毒菌。本研究中針對細(xì)菌進(jìn)化過程中的這些特點，在齊小保博士基因芯片篩查結(jié)果分析的基礎(chǔ)上，利用Cluster和TreeView軟件，將發(fā)生基因缺失的菌株進(jìn)行分類，分為A1、A2、B和KM類，選取人21，65，143，223，248，五株1999年徐州

3、人群爆發(fā)的源于病人的菌株以及A2類10株菌作PCR驗證，結(jié)果顯示：1.人21，65，143，223，248，cva120，882364，050島z1797，1799，1800基因全部缺失；人21，65，143，223，882364，076島z2970，2971，2972，2973，2974，2976，2977，2978，2979，2980發(fā)生全部缺失，人248，cva120，076島未發(fā)生缺失，但它們stx1發(fā)生了缺失。2.A2類菌株中

4、045、050、093、0108的部分基因發(fā)生了普遍缺失，其中與代謝相關(guān)的基因有17個；與基因水平轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因有26個；與結(jié)構(gòu)蛋白相關(guān)的基因有7個；與調(diào)節(jié)相關(guān)的基因有9個；未知功能的基因有12個。 在基因芯片篩查中以及PCR檢測中發(fā)現(xiàn)，在1999、2000年徐州、安徽、河南、日本的15份病人或動物標(biāo)本中050島有Z1797、z1799基因的普遍缺失；而在大腸桿菌O157：H7 EDL933的全序列注釋中，050島z1824與C

5、NF2氨基酸序列有31.29％的同源性；基于以上兩點，我們有必要對出血性大腸桿菌O157：H7的O50島進(jìn)行功能初探，在本研究中，首先從z1824入手，成功構(gòu)建了pET-30a(+)-z1824表達(dá)載體，并通過克隆子測序、雙酶切、PCR鑒定以及SDS-PAGE和Western-Blot證實表達(dá)的蛋白為O50島Z1824，在此基礎(chǔ)上，參考細(xì)胞壞死毒素的致病性，進(jìn)行了Hela細(xì)胞毒性實驗，結(jié)果顯示：在重組蛋白。Hela細(xì)胞毒性的初步研究中發(fā)