慶大霉素鼓室內(nèi)注射后在腦干前庭與聽覺中樞的分布和損傷的研究.pdf

1、目的：1)探索慶大霉素鼓室內(nèi)注射后在腦干前庭中樞是否有分布及其分布特點(diǎn)；2)探索鼓室內(nèi)注射慶大霉素后在腦干聽覺中樞是否有分布及其分布特點(diǎn)；3)鼓室內(nèi)注射慶大霉素后對(duì)于腦干前庭及聽覺核團(tuán)的影響
　　方法：1)本實(shí)驗(yàn)選用正常成年白化豚鼠作為研究對(duì)象,經(jīng)鼓室注射30mg/ml慶大霉素作為動(dòng)物模型;經(jīng)卵圓窗注射HRP逆行示蹤劑并結(jié)合既往文獻(xiàn),定位豚鼠前庭傳出神經(jīng)元；2)造模成功后,在不同時(shí)間點(diǎn)處死;行免疫組織化學(xué)、免疫熒光染色組,用多聚甲

2、醛進(jìn)行心臟灌注固定、取材,行冰凍切片,獲得連續(xù)腦片;行透射電鏡組,處死后用多聚甲醛和戊二醛混合液進(jìn)行心臟灌注固定、取材,繼而行振動(dòng)切片；3)通過甲苯胺藍(lán)染色標(biāo)記腦干不同核團(tuán)的相對(duì)位置,通過DAB染色,識(shí)別豚鼠前庭傳出神經(jīng)元;通過免疫組織化學(xué)單標(biāo)、三標(biāo)技術(shù)(anti-gentamicin標(biāo)記慶大霉素,anti-betaⅢtubulin標(biāo)記神經(jīng)元,DAPI標(biāo)記細(xì)胞核),了解慶大霉素的分布情況；4)熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡、透射電鏡下

3、觀察并拍照,AdobephotoshopCS2處理圖片,慶大霉素陽性細(xì)胞計(jì)數(shù),并用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：1)鼓室內(nèi)注射后,慶大霉素在前庭傳出神經(jīng)元、上橄欖核、耳蝸核均有染色,在前庭神經(jīng)節(jié)及前庭復(fù)合核無慶大霉素分布。在前庭傳出神經(jīng)元和上橄欖核,慶大霉素在給藥側(cè)及給藥對(duì)側(cè)均有染色,主要分布于神經(jīng)元胞漿及其突起,神經(jīng)核內(nèi)未見慶大霉素染色。在耳蝸核,僅給藥側(cè)出現(xiàn)明顯慶大霉素陽性標(biāo)記,對(duì)側(cè)耳蝸核未及慶大霉素染色;主要分布

4、于神經(jīng)元胞體以外,神經(jīng)元胞體內(nèi)未見任何陽性標(biāo)記;背側(cè)耳蝸核較腹側(cè)耳蝸核分布強(qiáng)。2)慶大霉素給藥后24小時(shí),前庭傳出神經(jīng)元即有慶大霉素染色。至3天達(dá)到高峰,7天時(shí)仍保持等同水平,至14天時(shí)慶大霉素陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少,至30天時(shí)進(jìn)一步減少。3)背側(cè)耳蝸核內(nèi)耳蝸神經(jīng)纖維、進(jìn)入腦干的前庭神經(jīng)纖維以及上橄欖核下行傳出神經(jīng)通路全程均可及慶大霉素標(biāo)記陽性。4)鼓室內(nèi)注射慶大霉素3天后,前庭Ⅰ型、Ⅱ型毛細(xì)胞的傳入及傳出突觸均可見顯著的空泡樣變性;支配Ⅱ

5、型毛細(xì)胞的傳入及傳出突觸發(fā)生空泡樣變性后,無法區(qū)分。5)給藥后3天,前庭傳出神經(jīng)核內(nèi)的有髓神經(jīng)纖維髓鞘板層松解,原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞嚴(yán)重水腫;神經(jīng)元突起出現(xiàn)顯著的空泡樣變性,內(nèi)容物溶解。給藥后30天,有髓神經(jīng)髓鞘板層排列緊湊整齊;神經(jīng)元胞質(zhì)及核明顯腫脹,電子密度降低,核內(nèi)染色質(zhì)缺失,胞漿內(nèi)線粒體可見少許小泡。給藥后3天,耳蝸核內(nèi)可見有髓神經(jīng)纖維髓鞘板層廣泛松解,而神經(jīng)元胞漿、樹突、細(xì)胞核未見明顯異常;給藥后30天,有髓神經(jīng)纖維髓鞘板層排列

6、緊湊整齊,另外可見神經(jīng)元外包繞的星形膠質(zhì)細(xì)胞突起明顯水腫。給藥后3天,上橄欖核內(nèi)有髓神經(jīng)纖維髓鞘板層松解,樹突內(nèi)空泡樣變性、胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多初級(jí)溶酶體;給藥后30天,有髓神經(jīng)髓鞘板層排列緊湊整齊,星形膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)、突起及核明顯腫脹,核團(tuán)內(nèi)可見暗細(xì)胞。
　　結(jié)論：1)鼓室內(nèi)注射慶大霉素后,不僅分布于耳蝸、前庭外周器官,相應(yīng)的中樞核團(tuán)也有分布,且保留慶大霉素一段時(shí)間;逆行性軸突運(yùn)輸是慶大霉素進(jìn)入前庭傳出神經(jīng)元、上橄欖核的可能方式。順行性

7、軸突運(yùn)輸是慶大霉素進(jìn)入耳蝸核的可能方式。2)前庭復(fù)合核無慶大霉素分布,可能原因包括:前庭神經(jīng)節(jié)基本無慶大霉素分布,以及跨突觸轉(zhuǎn)運(yùn)慶大霉素較不容易。3)慶大霉素對(duì)分布陽性的核團(tuán)造成直接損傷,對(duì)傳出神經(jīng)核團(tuán)的損傷較傳入核團(tuán)嚴(yán)重。給藥后3天,傳出神經(jīng)核團(tuán)神經(jīng)纖維髓鞘板層松解、神經(jīng)元突起空泡樣變性、原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫;至30天,髓鞘病變可逆性恢復(fù),但個(gè)別神經(jīng)元發(fā)生嚴(yán)重腫脹,甚至凋亡;給藥后,耳蝸核出現(xiàn)顯著的神經(jīng)纖維髓鞘變性,但神經(jīng)元未見明顯