腋臭患者大汗腺中ApoD和AR的表達(dá)變化及AP-1在其中的作用.pdf

1、腋臭的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。有研究表明，臭味的主要成分是(E)-3-甲基-2-己烯酸(E-3-methyl-2-hexenoic acid,E-3M2H)，揮發(fā)性硫化合物也占有一定比例[1]。人大汗腺中的載脂蛋白D(Apolipoprotein D,ApoD）是一種特異性大汗腺分泌物結(jié)合蛋白（Apocrine secretion odor-binding protein,ASOB）。它有兩種形式：ASOB1和ASOB2[2]。ASOB2

2、在氣味的運(yùn)輸過程中起主要作用。在體內(nèi)激素或者外部環(huán)境的影響下，大汗腺細(xì)胞中E-3M2H和ApoD/ASOB2的分泌量增加，E-3M2H與ApoD結(jié)合后分泌到大汗腺管腔，通過汗腺導(dǎo)管運(yùn)輸?shù)狡つw表面。在細(xì)菌的作用下分泌物分解產(chǎn)生刺鼻的辛辣氣味，這種氣味嚴(yán)重影響了腋臭患者的日常社交和心理健康。研究發(fā)現(xiàn)，JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與多種疾?。òǚ逝?、2型糖尿病、炎癥、神經(jīng)變性以及腫瘤等）的發(fā)生機(jī)制有關(guān)[3]。但是，目前國內(nèi)外沒有JNK與腋臭發(fā)病機(jī)制的

3、相關(guān)性研究。本課題組的前期研究表明：AR信號(hào)可以通過JNK1刺激ApoD的表達(dá)；但抑制JNK1并不能完全阻斷AR信號(hào)對(duì)ApoD的表達(dá)上調(diào)；提示AR還可能通過JNK1非依賴的方式刺激ApoD的表達(dá)。此外，JNK1本身可以刺激AR的轉(zhuǎn)錄活性，提示JNK1可能通過調(diào)控AR信號(hào)調(diào)節(jié)ApoD的表達(dá)。因此，可以設(shè)想AR信號(hào)和JNK1信號(hào)之間存在某種反饋。本研究通過收集腋臭組和正常組(兩組均為志愿者)腋下皮膚組織標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)（Immunohi

4、stochemistry,IHC）、蛋白質(zhì)印跡法（Westernblotting,WB）、熒光定量PCR（Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR）等方法檢測載脂蛋白D(Apolipoprotein D,ApoD）和雄激素受體(androgen receptor,AR)在大汗腺中的含量，探討ApoD和AR與腋臭氣味強(qiáng)度的關(guān)系。用5α-二氫睪酮聯(lián)合AP-1抑制劑姜黃素（Curcum

5、in）處理培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞，進(jìn)一步研究腋臭發(fā)病過程中JNK1下游轉(zhuǎn)錄因子AP-1在腋臭發(fā)病過程中的作用。從而更好地為腋臭的預(yù)防、診斷和治療提供理論依據(jù)和臨床指導(dǎo)。
　　目的：
　　1)對(duì)腋臭組和正常組（兩組均為志愿者）腋部大汗腺組織中ApoD和AR進(jìn)行檢測，探討它們?cè)谝赋舭l(fā)病中的表達(dá)變化及作用。
　　2)探討腋臭患者大汗腺組織中ApoD和AR的含量與氣味強(qiáng)度之間的關(guān)系，明確它們?cè)谝赋舭l(fā)病中的作用。
　　3)在明確A

6、poD和AR與腋臭氣味強(qiáng)度之間的關(guān)系以及課題組前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討JNK1下游轉(zhuǎn)錄因子AP-1對(duì)ApoD的上調(diào)作用。更深入的研究腋臭發(fā)病通路，為腋臭的臨床治療開辟新的途徑。
　　方法：
　　1)收集腋臭組和正常組(兩組均為志愿者)腋下皮膚組織標(biāo)本，用HE、免疫組織化學(xué)、Western blotting和Real-time PCR等方法檢測ApoD和AR在大汗腺中的表達(dá)，使用Image-Pro Plus 5.0和Flu

7、orChemFC2分析系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。
　　2)吩咐腋臭志愿者在腋臭氣味強(qiáng)度檢測前一天沐浴并禁食辛辣刺激食物，檢測當(dāng)天在舒適的環(huán)境下進(jìn)行（室內(nèi)清潔，室溫28°C，關(guān)閉門窗）。志愿者充分暴露腋區(qū)，由3名醫(yī)生分別距志愿者1m、3m和5m聞腋臭氣味。按照能在≤1m、≤3m、≤5m距離聞及氣味把志愿者分為輕、中、重3級(jí)。在所有腋臭志愿者行手術(shù)治療的同時(shí)取腋下皮膚組織標(biāo)本。標(biāo)本經(jīng)處理后做Real-timePCR檢測ApoD和AR的含量，

8、然后做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與處理。
　　3)取腋臭志愿者腋區(qū)皮膚組織，進(jìn)行汗腺細(xì)胞培養(yǎng)。用Curcumin抑制AP-1的活性，通過Real-time PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測ApoD在Curcumin抑制下的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1)腋臭組大汗腺組織中ApoD和AR的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，兩組之間表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。
　　2)ApoD和AR相對(duì)表達(dá)量的等級(jí)與氣味強(qiáng)度之間有相關(guān)關(guān)系(P﹤0.05)。Ap

9、oD和AR相對(duì)表達(dá)量的等級(jí)隨著氣味強(qiáng)度的增加而增高。
　　3)在Curcumin抑制下，ApoD表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1)ApoD和AR在腋臭患者大汗腺組織中表達(dá)增高，可能在腋臭發(fā)病過程中起了重要作用。
　　2)ApoD和AR可能在腋臭氣味產(chǎn)生過程中起到非常關(guān)鍵的作用。
　　3)Curcumin抑制了AP-1的活化導(dǎo)致ApoD表達(dá)降低。在腋臭的發(fā)病過程中，JNK1的下游轉(zhuǎn)錄因子AP-1對(duì)ApoD有