脂肪細胞基因表達的影響因素以及JNK在其中的作用.pdf

1、目的：脂肪細胞具有強大內(nèi)分泌功能，可以特異性分泌脂聯(lián)素(adiponectin)和抵抗素(resistin)等脂肪細胞因子(adipokines)，影響了胰島素代謝和葡萄糖轉(zhuǎn)運，參與肥胖和2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程。C-jun氨基端激酶(C-junNH2-terminalkinase，JNK)是絲裂原活化的蛋白激酶家族成員，它的激活影響了胰島素信號通路、炎癥反應(yīng)以及細胞凋亡。我們用適當(dāng)?shù)臈l件將3T3-L1脂肪前體細胞誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細

2、胞，觀察不同濃度胰島素、葡萄糖等刺激對其adiponectin和resistin基因表達的影響，并通過抑制脂肪細胞中JNK蛋白活性探討其在肥胖和2型糖尿病相關(guān)的胰島素抵抗發(fā)生機制中的作用。 方法：1、3T3-L1脂肪前體細胞生長接觸至單層后，采用0.5mMIMX+2uM地塞米松+10ug/ml胰島素誘導(dǎo)方案誘導(dǎo)其分化至一定天數(shù)，在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、脂滴的形成。 2、利用熒光定量PCR技術(shù)，從基因表達水平研究不同濃

3、度胰島素、葡萄糖對脂肪細胞adiponectin和resistinmRNA表達的影響，并同時用特異性抑制劑SP600125抑制JNK蛋白活性，觀察脂肪細胞3adiponectin和resistin基因表達的變化。 結(jié)果：1、分化開始后的3T3-L1細胞從最初的梭形逐漸演變?yōu)閳A形，細胞體積增大，胞漿內(nèi)出現(xiàn)由少而多的脂滴，到第10天，平均有90﹪以上的前體細胞分化為成熟脂肪細胞，高倍鏡下可見透亮融合的脂滴。 2、與低濃度胰島

4、素組相比，給予高濃度胰島素(100nM)刺激分化成熟的3T3-L1細胞，其adiponectin基因表達明顯減少(P＜0.01)，resistin基因表達增加(P＜0.01)；同樣的，高濃度葡萄糖(25mM)對成熟脂肪細胞也產(chǎn)生類似效應(yīng)，使得adiponectin基因表達與低濃度葡萄糖組相比明顯降低(P＜0.01)，而resistin基因表達則增加(P＜0.01)；在使用SP600125抑制JNK后高濃度胰島素刺激組與不加抑制劑的單純高

5、濃度胰島素刺激組相比，其adiponectin基因表達明顯升高(P＜0.01)，resistin表達則降低(P＜0.01)；而抑制劑加高濃度胰島素刺激組與單純低濃度胰島素組相比，adiponectin基因表達仍然降低(P＜0.05)，resistin基因表達升高(P＜0.05)；同時SP600125抑制后用高濃度葡萄糖(25mM)刺激脂肪細胞，其adiponectin基因表達與單純高濃度葡萄糖刺激組相比要也明顯升高(P＜0.01)，re

6、sistin基因表達降低(P＜0.01)；與單純低濃度葡萄糖組相比，抑制劑加高濃度葡萄糖刺激組其adiponectin基因表達仍降低(P＜0.05)，resistin基因表達仍增加(P＜0.05)。抑制劑加低濃度胰島素或葡萄糖刺激組，與各自單純低濃度組相比，兩個基因的表達均4無明顯變化(P＞0.05)。 結(jié)論：1、上述脂肪細胞誘導(dǎo)分化方案能使3T3-L1脂肪前體細胞有效分化，且分化均一，分化效率高，成熟時(10-12天)細胞大而

7、圓，脂滴明顯，部分可融合成較大的脂滴。 2、胰島素對成熟脂肪細胞adiponectin和resistin的基因表達能產(chǎn)生明顯影響，并且與刺激濃度相關(guān)；葡萄糖對adiponectin和resistin兩基因在脂肪細胞的特異性表達也能產(chǎn)生與刺激濃度相關(guān)的影響。 3、JNK蛋白在胰島素和葡萄糖影響脂肪細胞表達adiponectin和resistin的過程中起到了介導(dǎo)作用，能部分扭轉(zhuǎn)高濃度胰島素或葡萄糖刺激對脂肪細胞的基因表達的