人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨侵襲模型的建立及PTHLH蛋白在其中的表達(dá).pdf

1、目的:神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuro blastoma,NB)是兒章最常見的顱外實(shí)體腫瘤,是嬰兒時(shí)期診斷的最常見的新生腫物。NB占15歲以下惡性腫瘤病例的6-10%,占所有兒科腫瘤死亡病例的15%[2]。探討如何建立適合長期研究與治療的人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NB)骨侵襲的動(dòng)物模型以及骨侵襲相關(guān)因子PTHLH蛋白在其中的表達(dá),對臨床研究NB的侵襲相關(guān)有重要的指導(dǎo)意義。
　　 方法:收集10代以內(nèi)處于對數(shù)生長期SH-SY5Y腫瘤細(xì)胞,機(jī)械分離

2、制成單細(xì)胞懸液,以無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度,然后采用骨髓腔內(nèi)注射與肌肉內(nèi)注射的方法分別種植到無胸腺裸鼠體內(nèi)。待局部成瘤后,應(yīng)用外科手術(shù)方法將腫瘤及其周圍組織取材,經(jīng)甲醛固定,脫鈣,石蠟包埋,切片等步驟后,采用免疫組化的方法比較骨髓腔內(nèi)成瘤和肌肉內(nèi)成瘤中PTHLH的表達(dá)。分別收集SH-SY5Y細(xì)胞及2種成瘤方式的腫瘤組織,充分破碎后,提取其中的蛋白質(zhì),應(yīng)用Western-Blot的方法檢測PTHLH蛋白在其中的表達(dá)。
　　

3、 結(jié)果:
　　 1、SH-SY5Y細(xì)胞系細(xì)胞在骨髓內(nèi)直接種植在全部試驗(yàn)動(dòng)物中可以侵襲骨質(zhì)形成溶骨性病變:
　　 2、SH-SY5Y細(xì)胞系細(xì)胞肌肉內(nèi)直接種植在全部試驗(yàn)動(dòng)物中可以形成腫瘤,但無法侵襲骨質(zhì)形成融骨性改變。
　　 3、免疫組化結(jié)果顯示所成的腫瘤中均有PTHLH蛋白的表達(dá),定位于胞漿。在骨髓內(nèi)成瘤的組織內(nèi)表達(dá)量較多。
　　 4、Western-Blot結(jié)果顯示PTHLH的蛋白含量骨髓內(nèi)成瘤最高,肌