腦紅蛋白對小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系生長速度的影響.pdf

1、背景與目的：
　　腦紅蛋白（neuroglobin，Ngb）過去被認(rèn)為在神經(jīng)元細(xì)胞的特異性表達(dá)，然而現(xiàn)在在多種腫瘤細(xì)胞中也被發(fā)現(xiàn)存在表達(dá)。這說明Ngb除了參與低氧調(diào)節(jié)和保護(hù)神經(jīng)元及腦組織免于缺血缺氧性損傷外，可能在腫瘤的發(fā)生、形成和代謝中也發(fā)揮了作用。迄今為止，揭露Ngb和腫瘤發(fā)生之間直接聯(lián)系的文章很少。然而，另兩個(gè)球蛋白家族的成員，肌紅蛋白（myoglobin，Mb）和細(xì)胞紅蛋白（cytoglobin，Cygb）已被多次報(bào)道參與

2、了腫瘤的形成。其可能機(jī)制包括清除氧氮自由基，通過調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）表達(dá)，參與低氧環(huán)境下的適應(yīng)，以及增加線粒體膜的穩(wěn)定性。這些過程說明球蛋白家族或多或少通過和細(xì)胞色素c之間的某種聯(lián)系，參與干擾細(xì)胞凋亡途徑。
　　之前有研究通過人類免疫缺陷病毒1型反式激活因子（transactivator of transcription，TAT）蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)，使大分子Ngb蛋白成功穿

3、過血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）進(jìn)入腦內(nèi)，解決了Ngb進(jìn)入腦內(nèi)細(xì)胞發(fā)揮腦保護(hù)作用的瓶頸問題，使臨床應(yīng)用成為可能。因此，實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用之前，去探索Ngb對腦腫瘤發(fā)生、發(fā)展的潛在影響具有重要意義。
　　本研究擬通過探討Ngb是否在腦腫瘤細(xì)胞系中存在表達(dá)，并結(jié)合慢病毒載體介導(dǎo)，上調(diào)小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系N2a內(nèi)Ngb的表達(dá)，來研究Ngb過表達(dá)狀態(tài)下細(xì)胞的生長和增殖情況，為將來深入其機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)，為Ngb在

4、腦血管病的神經(jīng)保護(hù)治療中的應(yīng)用提供保障。
　　方法：
　　1.通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR）、細(xì)胞免疫熒光、estern Blot的方法，檢查Ngb在小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（N2a）、人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系（U251）、大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（C6）中的表達(dá)情況。
　　2.將包裝好的Ngb過表達(dá)慢病毒導(dǎo)入N2a細(xì)胞，上

5、調(diào)其表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物通過Western Blot鑒定，并進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)去觀察處理組和對照組之間細(xì)胞的增殖情況，包括細(xì)胞活力檢測和克隆形成試驗(yàn)。
　　結(jié)果
　　1.通過RT-PCR、免疫熒光檢查和Western Blot，表明Ngb在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（N2a）與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（U251、C6）均有表達(dá)。
　　2.感染Lenti-Ngb-GFP組的Ngb表達(dá)較對照組和Lenti-GFP組顯著升高。
　　3. Lent

6、i-Ngb-GFP感染組從第六天起細(xì)胞增值速度明顯快于其他組（P<0.01）。在相同環(huán)境培養(yǎng)14天后，慢病毒感染組和對照組在克隆數(shù)量上未見差異。然而Lenti-Ngb-GFP組形成的細(xì)胞克隆平均大于Lenti-GFP組和對照組（P<0.05）。
　　結(jié)論
　　1.通過RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光的方法證實(shí)Ngb在多種腦腫瘤細(xì)胞系中存在表達(dá)。
　　2.通過使用Lenti-Ngb-GFP感染N2a細(xì)胞，成功上調(diào)了N2a細(xì)胞內(nèi)