骨關(guān)節(jié)炎軟骨中Ⅵ型膠原空間分布的變化規(guī)律及HtrA1在其中的作用.pdf

1、目的:探討Ⅵ型膠原蛋白在OA軟骨中的空間分布較健康軟骨Ⅵ型膠原的變化規(guī)律;其次通過研究HtrA1在OA軟骨中的分布規(guī)律及其與Ⅵ型膠原分布改變的關(guān)系，探討HtrA1在OA發(fā)病中的作用。
　　方法:利用模型組Hartley豚鼠自發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎模型和對照組健康組豚鼠，取膝關(guān)節(jié)軟骨做冰凍切片，進行旺染色和Ⅵ型膠原免疫熒光染色，而后利用Delta-Vision Elite成像系統(tǒng)和Imaris軟件進行斷層掃描、3D重建和定量分析，比較模型組和

2、對照組軟骨組織的細胞數(shù)量和體積、Ⅵ型膠原的厚度與體積以及Ⅵ型膠原體積與細胞體積比值的差異;其次，利用以上模型及對照組，取膝關(guān)節(jié)軟骨做石蠟切片，進行番紅O染色、HtrA1免疫組化染色以及HtrA1、Ⅵ型膠原免疫熒光雙染色，比較兩組軟骨在大體形態(tài)、HtrA1免疫組化染色陽性率等方面的差異以及HtrA1與Ⅵ型膠原分布關(guān)系。
　　結(jié)果:正常軟骨中，薄層Ⅵ型膠原層均勻包裹軟骨細胞，各層細胞外Ⅵ型膠原層厚度無明顯差別，體積隨細胞深度增加而增加

3、;骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，Ⅵ型膠原體積減小且空間分布不規(guī)則，移行層呈蜂窩狀或出現(xiàn)空洞，放射層中呈點、片狀彌散分布，且在細胞周基質(zhì)外出現(xiàn)散在的Ⅵ型膠原。隨著軟骨組織的退化，OA組番紅O染色與健康對照組軟骨相比，軟骨細胞外基質(zhì)中的蛋白多糖含量明顯減少，且蛋白多糖多集中與軟骨囊(PCM和TM)內(nèi)，符合OA關(guān)節(jié)退化特征。正常關(guān)節(jié)軟骨組織內(nèi)HtrA1的染色陽性細胞數(shù)較少，且在移行層和放射層較表面層較多;OA軟骨內(nèi)HtrA1的染色陽性細胞數(shù)接近100％，各

4、層細胞陽性率無明顯差別，且染色陽性的區(qū)域局限于胞核和胞質(zhì)，胞外基質(zhì)呈陰性。正常軟骨中，移行層和放射層的Ⅵ型膠原和HtrA1共存;OA軟骨中，移行層和放射層的Ⅵ型膠原分布不規(guī)則，且Ⅵ型膠原缺失的部位呈HtrA1熒光強陽性，表明HtrA1在Ⅵ型膠原分布的改變中有重要作用。
　　結(jié)論:在骨關(guān)節(jié)炎軟骨中Ⅵ型膠原體積減少，不完全包裹軟骨細胞，出現(xiàn)蜂窩、空洞和彌散分布的現(xiàn)象;骨關(guān)節(jié)炎軟骨中幾乎所有軟骨細胞分泌的HtrA1增多，且分布于胞質(zhì)和胞