鹽酸氨酮戊酸光動(dòng)力法對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的研究.pdf

1、目的:
　?、沤⒖煽康捏w外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(KFB)的方法,觀察其生物學(xué)特征,為瘢痕疙瘩的體外實(shí)驗(yàn)構(gòu)建平臺(tái)。
　　⑵研究鹽酸氨酮戊酸光動(dòng)力法(ALA-PDT)對(duì)KFB增殖的抑制作用,初步探討ALA-PDT對(duì)瘢痕疙瘩的作用機(jī)理,為臨床預(yù)防和治療瘢痕疙瘩提供理論依據(jù)。
　?、茄芯緼LA-PDT對(duì)KFB凋亡的影響,分析凋亡過(guò)程中Caspase3、8、9表達(dá)的水平,對(duì)凋亡通路進(jìn)行初步探討。
　　方法:
　　

2、⑴采用組織貼壁法進(jìn)行體外瘢痕疙瘩的成纖維細(xì)胞的培養(yǎng),并進(jìn)行傳代,觀察其生物學(xué)特征,并采用免疫細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行成纖維細(xì)胞的鑒定。
　?、茖Ⅲw外培養(yǎng)的KFB,分別加入含ALA0.5mmol/l、1.0mmol/l、2.0mmol/l、4.0mmol/l、8.0mmol/l濃度的DMEM培養(yǎng)液,避光培養(yǎng)5h后,用光動(dòng)力儀照射,能量密度1~64J/cm2,CCK8檢測(cè)KFB的活性,計(jì)算其增殖水平。
　?、菍Ⅲw外培養(yǎng)的KFB,加入含AL

3、A4.0mmol/l濃度的DMEM,避光培養(yǎng)5h,光動(dòng)力治療儀照射,能量密度32J/cm2,測(cè)試其Caspase3、8、9的表達(dá)水的變化。
　　結(jié)果:
　?、沤M織貼壁法培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,接種后5天可以見(jiàn)到組織邊緣有細(xì)胞萌出,培養(yǎng)3~4周后可以傳第一代,對(duì)第3~5代成纖維細(xì)胞進(jìn)行波形蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色,可見(jiàn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞胞漿內(nèi)大量棕黃色顆粒,核為藍(lán)色,波形蛋白為陽(yáng)性。
　　⑵照射能量在>8.0J/cm2時(shí),隨著ALA

4、濃度和照射劑量增加,對(duì)細(xì)胞的抑制作用也增強(qiáng)。
　?、茿LA-PDT能同時(shí)增強(qiáng)Caspase-3、8、9的活性,表達(dá)水平上升。
　　結(jié)論:
　　⑴組織貼壁法培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,操作簡(jiǎn)單,節(jié)約成本且能獲得活性高、純度高的成纖維細(xì)胞,可以作為瘢痕疙瘩體外實(shí)驗(yàn)的研究。
　　⑵本實(shí)驗(yàn)表明ALA-PDT對(duì)KFB的增殖具有明顯抑制作用,ALA濃度和激光的能量是影響細(xì)胞存活率的重要因素。
　?、茿LA-PDT能夠誘導(dǎo)KFB的凋