羧甲基殼聚糖納米微粒的制備及其對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、瘢痕疙瘩是皮膚損傷后引發(fā)的膠原異常積聚所致的過(guò)度瘢痕化，其產(chǎn)生原因主要是由于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞合成與分泌膠原能力的增強(qiáng)或此種細(xì)胞的大量增殖。羧甲基殼聚糖(羧甲基殼聚糖)作為一種水溶性的殼聚糖(CS)衍生物，具有良好的生物相容性和組織親和性，它能夠促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，在皮膚軟組織修復(fù)方面有著較好的應(yīng)用。本文構(gòu)建了羧甲基殼聚糖納米微粒體系，利用黃種人瘢痕疙瘩組織體外培養(yǎng)得到瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，研究了羧甲基殼聚糖納米微粒體系對(duì)于瘢痕疙瘩成

2、纖維細(xì)胞增殖的影響，并初步討論了其作用機(jī)理。
　　 1、羧甲基殼聚糖納米微粒的制備和性質(zhì)檢測(cè)
　　 通過(guò)堿化溶脹殼聚糖和氯乙酸的取代反應(yīng)，制備了兩種不同分子量(196kDa和6.3kDa)的羧甲基殼聚糖樣品，分子量為196kDa的羧甲基殼聚糖經(jīng)雙氧水降解6h、9h后，得到了分子量為16kDa和7.5kDa的羧甲基殼聚糖，所制備的四種羧甲基殼聚糖樣品具有良好的水溶性，并且脫乙酰度(DD)和羧甲基度(DS)基本相同(DD：9

3、2％±2％；DS：78％±3％)。通過(guò)離子交聯(lián)法制備了四種分子量不同的羧甲基殼聚糖納米微粒。通過(guò)紅外光譜檢測(cè)證明了羧甲基殼聚糖以及羧甲基殼聚糖納米微粒被成功合成。隨后通過(guò)透射電鏡以及動(dòng)態(tài)光散射粒度分析儀檢測(cè)了羧甲基殼聚糖納米微粒的表觀形態(tài)和粒度分布。結(jié)果表明，羧甲基殼聚糖納米微粒呈規(guī)則球形，無(wú)粘連，且粒徑分布在180nm-250nm。
　　 2、瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)
　　 利用黃種人瘢痕疙瘩組織體外培養(yǎng)得到瘢痕疙

4、瘩成纖維細(xì)胞。原代培養(yǎng)10-15天后，在瘢痕疙瘩組織塊附近，成纖維細(xì)胞從組織塊周?chē)w移出來(lái)，并伴有少量的上皮細(xì)胞生長(zhǎng)，經(jīng)3-5次傳代培養(yǎng)后，上皮細(xì)胞消失，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞大量生長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制，發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在傳代后的第二天達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
　　 3、羧甲基殼聚糖納米微粒對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的影響
　　 采用MTT法，研究了不同濃度、不同作用時(shí)間以及不同分子量的羧甲基殼聚糖納米微

5、粒對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明：不同分子量的羧甲基殼聚糖納米微粒對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖均有抑制作用，羧甲基殼聚糖納米微粒的作用濃度在2μ g/mL-200μ g/mL時(shí)，抑制率隨著羧甲基殼聚糖納米微粒作用濃度的增加而升高，當(dāng)羧甲基殼聚糖納米微粒濃度為100μ g/mL時(shí)，達(dá)到最小抑制濃度，對(duì)于四種分子量不同的羧甲基殼聚糖納米微粒，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的抑制率隨著羧甲基殼聚糖納米微粒分子量的降低而升高，分子量為6.3kD

6、a的羧甲基殼聚糖納米微粒具有最高抑制率，達(dá)到48.79％。與羧甲基殼聚糖水溶液相比，羧甲基殼聚糖納米微粒對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的抑制率隨著時(shí)間(1天-6天)的變化，表現(xiàn)出前低后高的趨勢(shì)，當(dāng)作用時(shí)間達(dá)到6天時(shí)，羧甲基殼聚糖納米微粒與羧甲基殼聚糖水溶液對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的抑制率基本相同(羧甲基殼聚糖納米微粒：48.79％；羧甲基殼聚糖水溶液：49.69％；p=0.844)。通過(guò)比較殼聚糖、羧甲基殼聚糖水溶液和羧甲基殼聚糖納米微粒對(duì)于瘢痕