EGCG抑制人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞裸鼠移植瘤生長及新生血管形成實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對人胃腺癌細(xì)胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤生長及新生血管形成的抑制作用,并探討其分子機(jī)制。
　　方法:
　　1. EGCG對體外培養(yǎng)人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響:采用MTT比色法求EGCGIC50值、繪制細(xì)胞生長曲線、求群體倍增時(shí)間并檢測細(xì)胞活力,觀察 EGCG對SGC-7901細(xì)胞的生長抑制作用。
　　2.人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞裸鼠異種移植瘤

2、模型的建立和分組:BALB/C裸小鼠分別于背側(cè)靠腋窩皮下接種0.2ml/只(相當(dāng)于2×106個(gè)細(xì)胞)。30只實(shí)驗(yàn)裸鼠分為6組,即生理鹽水對照組、5-氟尿嘧啶陽性藥對照組、米諾環(huán)素(Minocycline)血管形成抑制劑陽性藥對照組、5mg/kg濃度EGCG組、10mg/kg濃度EGCG組、20mg/kg濃度EGCG組。成瘤后,生理鹽水對照組隔日腹腔注射生理鹽水,其余各組隔日腹腔給藥。
　　3.評價(jià)EGCG治療人胃癌的有效性:繪制裸

3、鼠異種移植瘤體積生長曲線,處死裸鼠后稱瘤重,計(jì)算抑瘤率;Western blot檢測不同濃度EGCG及陽性對照藥對移植瘤組織細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-KB(P65)蛋白表達(dá)的影響;間接免疫熒光標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測移植瘤血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)熒光峰值的表達(dá)情況;酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA法)檢測各組裸鼠血清中VEGF的濃度;采用免疫組化SP法對移植瘤中VEGF、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測及計(jì)數(shù)CD34標(biāo)記的微血管密度

4、。
　　結(jié)果:
　　1.在體外抗癌細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中,EGCG對人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞MTT比色結(jié)果顯示EGCG能呈濃度依賴性抑制SGC-7901細(xì)胞增殖,不同濃度EGCG(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml)處理SGC-7901細(xì)胞48h后,其細(xì)胞增殖抑制率分別為21.7％、32.8%、52.5%、61.3%、66.5%,與空白對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)。IC5

5、0為58.60μg/ml。
　　2. EGCG濃度從20μg/ml增加到100μg/ml時(shí),細(xì)胞群體倍增時(shí)間由34.50h延長到94.74 h(P<0.05);細(xì)胞活力檢測結(jié)果顯示,生理鹽水組與 EGCG各濃度處理組細(xì)胞存活率差異無顯著性(P﹥0.05)。
　　3.成功建立人胃腺癌細(xì)胞裸鼠異種移植瘤模型。EGCG作用20天5mg/kg組平均瘤重1.094克,平均抑瘤率為34.51%,與生理鹽水組差異有顯著性意義(P<0.05

6、);10mg/kg組平均瘤重0.905克,平均抑瘤率為45.81%;20mg/kg組平均瘤重0.758克,平均抑瘤率為54.64%,與生理鹽水組差異均有顯著性意義(P<0.01)。
　　4.Western blot分析表明:核轉(zhuǎn)錄因子NF-KB(P65)蛋白表達(dá)隨EGCG濃度的升高而降低,呈濃度依賴性。
　　5.間接免疫熒光標(biāo)記的流式結(jié)果顯示:EGCG5mg/kg組對間接免疫熒光標(biāo)記VEGF熒光峰值的表達(dá)與生理鹽水組差異無明

7、顯作用(P﹥0.05);EGCG10mg/kg組、20mg/kg組VEGF熒光峰值的表達(dá)有濃度依賴性抑制作用,與生理鹽水組差異有顯著性意義(P<0.05)。
　　6.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:EGCG5mg/kg組,血清VEGF濃度與生理鹽水組比無明顯差異(P>0.05);EGCG10mg/kg組,20mg/kg組血清VEGF濃度低于生理鹽水組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　7.免疫組化結(jié)果顯示:生理鹽水對照組VEGF

8、和MMP-2蛋白的高表達(dá)率與各濃度 EGCG組兩種蛋白的表達(dá)率降低比較,兩者差異有顯著性意義(P<0.05);CD34標(biāo)記的微血管密度與血管浸潤的強(qiáng)度有關(guān),各組微血管計(jì)數(shù)結(jié)果 EGCF20mg/kg組最少。
　　結(jié)論:
　　1.EGCG對體外培養(yǎng)的人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞具有抑制增殖作用,呈濃度依賴性;
　　2.EGCG可抑制人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞裸鼠異種移植瘤的生長;
　　3.EGCG可能通過抑制VE