兩種母雞繁殖生理的比較及影響卵泡發(fā)育相關(guān)因素的研究.pdf

1、由于技術(shù)改革，在過去的三十年里中國的養(yǎng)禽業(yè)取得巨大的發(fā)展。這促使中國成為世界上最大的禽蛋和禽肉生產(chǎn)國。此外，養(yǎng)禽業(yè)也滿足國家的13.5億人民的營養(yǎng)需求與優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的供給。中國家禽業(yè)主要依賴于飼養(yǎng)本地品種和進(jìn)口品種的肉用型和蛋用型雞。雞蛋的生物學(xué)價值全面，含有大量的維生素、礦物質(zhì)及質(zhì)美價廉的蛋白質(zhì)。由于國家經(jīng)濟(jì)的多重上漲，消費者的購買力增加，這顯示出對家禽產(chǎn)品的市場需求。FAO預(yù)測未來十年人均雞肉消費量從11.2/kg/年增加到13.8/

2、kg/年。很明顯消費者喜歡的地方品種雞，因其低產(chǎn)性能這將很難應(yīng)對家禽產(chǎn)品的供應(yīng)和需求。只能通過與高產(chǎn)的商品蛋雞進(jìn)行比較，進(jìn)而識別阻礙地方品種生產(chǎn)性能的生物因子，然后通過品種的選育來平衡地方品種雞的不足。家禽的生產(chǎn)性能主要是取決于卵泡發(fā)育，因此有必要深入研究卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)機(jī)理以及通過其調(diào)控來改進(jìn)品種。本文旨在比較傳統(tǒng)地方品種雞與商業(yè)蛋雞的差異，建立卵泡的體外培養(yǎng)體系，研究生長因子對卵泡發(fā)育的調(diào)控作用，為進(jìn)一步調(diào)高地方品種蛋雞的產(chǎn)蛋性能提供

3、理論依據(jù)。
　　1.高產(chǎn)和低產(chǎn)品種蛋雞肝臟和卵巢發(fā)育的比較
　　為了比較高產(chǎn)和低產(chǎn)兩種不同品種蛋雞的產(chǎn)蛋性能的差異，在實驗一中我們比較高產(chǎn)和低產(chǎn)蛋雞的卵巢中各級卵泡的發(fā)育情況。為此，本實驗以不同產(chǎn)蛋性能蛋雞（振寧土雞和海蘭蛋雞）作為實驗動物。振寧土雞是浙江省優(yōu)良的地方品種，采用多種生態(tài)環(huán)境的放養(yǎng)模式進(jìn)行飼養(yǎng)管理。首先我們比較這兩個品種蛋雞的肝臟、卵巢和輸卵管的指數(shù)。此外，比較這兩個品種蛋雞的肝臟、卵巢和輸卵管的組織形態(tài)學(xué)的差

4、異。最后，比較這兩個品種蛋雞的蛋品質(zhì)。結(jié)果表明，海蘭蛋雞的肝臟、卵巢和輸卵管指數(shù)顯著高于振寧土雞。此外，盡管兩個品種蛋雞的輸卵管大小相似，但海蘭蛋雞的輸卵管重量顯著高于振寧土雞。除此以外，海蘭蛋雞的卵巢重量和等級卵泡也比振寧土雞的大，而且組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)明顯的差異。而兩個品種蛋雞的蛋品質(zhì)方面也存在明顯的差異。與振寧土雞相比，海蘭蛋雞的蛋重和蛋白重較大，哈氏單位和蛋白的高度也比較高。因此，具有不同產(chǎn)蛋性能的振寧土雞和海蘭蛋雞在肝臟、卵巢

5、輸卵管指數(shù)及其形態(tài)方面都存在差異。
　　2.蛋雞原始卵泡的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　蛋雞的高產(chǎn)性能主要還依賴于調(diào)節(jié)因子調(diào)節(jié)原始卵泡進(jìn)入等級發(fā)育。卵泡體外培養(yǎng)體系的建立對于研究卵泡發(fā)育是一項非常有用的技術(shù)。因此，本實驗我們采用酶分離法分離卵泡并采用不同的培養(yǎng)條件培養(yǎng)原始卵泡。本實驗旨在分離足夠數(shù)量的原始卵泡，并確定適宜的培養(yǎng)條件。為此，我們以2周齡的小雞為研究對象，比較不同的酶如胰蛋白酶-EDTA、膠原酶Ⅱ和ⅠA以及機(jī)械分離法分離

6、雞原始卵泡。我們計數(shù)分離的卵泡數(shù)量，并采用中性紅染色檢測卵泡的活性。然后分離的卵泡采用不同的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)如海藻酸鹽凝膠、甲基纖維素、礦物油、浮動和平面培養(yǎng)。實驗結(jié)果表明，由胰蛋白酶-EDTA分離的卵泡數(shù)量最多，其次為膠原酶Ⅱ，然后是膠原酶ⅠA和機(jī)械分離法。不同的酶和分離方法獲得的卵泡恢復(fù)率有顯著的差異。由機(jī)械分離法獲得的卵泡活性最高。此外，酶對卵泡的形態(tài)的影響也有差異?；蔚穆涯讣?xì)胞數(shù)在膠原酶Ⅱ和膠原酶ⅠA組較高。膠原酶ⅠA，裸卵母

7、細(xì)胞在胰蛋白酶-EDTA和膠原酶Ⅱ組較高。此外，我們的卵泡體外培養(yǎng)結(jié)果表明培養(yǎng)12 d后海藻酸鹽凝膠組具有最多的存活率。而且，形態(tài)學(xué)結(jié)果表明原始卵泡的平均直徑在50～53μm范圍，卵母細(xì)胞周圍的扁平顆粒細(xì)胞數(shù)平均大于12個。因此，目前我們成功的分離并培養(yǎng)了雞的原始卵泡，為更進(jìn)一步研究雞的原始卵泡的生長發(fā)育奠定了基礎(chǔ)。
　　3.LIF對卵泡生長發(fā)育的作用
　　本實驗旨在研究不同的生長因子對不同發(fā)育階段卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)作用。為此，

8、我們選擇白血病抑制抑制(LIF)和干細(xì)胞生長因子(SCF)來研究他們對原始卵泡、初級卵泡和小黃卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)。我們采用卵巢體外培養(yǎng)模型來研究LIF和SCF對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)。分離16日齡小雞的卵巢，將皮質(zhì)層剪切成1mm3的組織塊，建立卵巢體外培養(yǎng)體系，DMEM培養(yǎng)液中添加了10μg/mL胰島素、5μg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白和3×10-8 mol/L亞硒酸鈉（稱ITS培養(yǎng)液）。在該培養(yǎng)模型中，添加不同濃度的LIF和SCF來檢測他們對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)作

9、用。采用BrdU摻入法和組織形態(tài)學(xué)法分析卵泡的發(fā)育。組織形態(tài)學(xué)和BrdU免疫熒光結(jié)果表明培養(yǎng)12d后，LIF和SCF顯著增加原始卵泡的生長。而且，BrdU摻入結(jié)果表明卵泡培養(yǎng)24 h后初級卵泡和小黃卵泡發(fā)生增殖。LIF免疫組化結(jié)果表明LIF在卵巢的不同發(fā)育階段都有表達(dá)。因此，以上研究結(jié)果表明，LIF和SCF間接地參與了原始卵泡、初級卵泡和小黃卵泡的生長和發(fā)育。
　　綜上所述，本研究比較了高產(chǎn)和低產(chǎn)兩種不同品種蛋雞的與產(chǎn)蛋性能相關(guān)的