維生素E對種母雞繁殖性能的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、在海蘭褐父母代種母雞飼糧中添加不同劑量的維生素E（以維生素E醋酸酯形式添加，以下簡稱VE），通過研究VE對種母雞生產(chǎn)性能、繁殖性能、卵母細(xì)胞卵黃生成受體(OVR)基因表達(dá)和體外培養(yǎng)的卵泡顆粒細(xì)胞增殖和凋亡的影響，從機(jī)體、分子和細(xì)胞三個(gè)層面來解釋VE對種母雞繁殖性能的影響及其調(diào)控機(jī)制，旨在探索種母雞獲得最佳繁殖性能的VE適宜添加劑量，明確其作用機(jī)制，為生產(chǎn)提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。
　　 試驗(yàn)一研究飼糧VE對種母雞生產(chǎn)及繁殖性能的影響。

2、試驗(yàn)選用48周齡海蘭褐種母雞288只，隨機(jī)分成6組，每組4個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)組以VE醋酸酯的形式添加VE，其添加水平分別是0、20、40、80、160和320 mg/kg，預(yù)試期2周，試驗(yàn)期8周。結(jié)果表明(1)增加飼糧VE濃度，可以顯著提高產(chǎn)蛋率，其中160 mg/kg組最高(P＜0.01)，而320 mg/kg組相對160 mg/kg組有下降趨勢;(2)改變飼糧中VE的濃度對種蛋蛋重、蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼相對重、蛋黃相對重和蛋黃顏色等蛋

3、品質(zhì)未見影響(P＞0.05)，但是160和320mg/kg的添加劑量使蛋殼厚度降低。(3)隨飼糧VE添加量的增加，卵泡發(fā)育情況和種蛋受精率、受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率、初生重、健雛率隨之提高，160mg/kg對卵泡發(fā)育最好(P＜0.05)，而320mg/kg的孵化成績最佳(P＜0.05);(4)飼糧VE的添加劑量對血清生殖激素?zé)o顯著影響（P＞0.05）。
　　 試驗(yàn)二研究飼糧VE對種蛋蛋黃和雞體組織中α-生育酚沉積(α-T)的影

4、響。建立了測定雞蛋黃及組織中α-T含量的快速測定方法，進(jìn)而以此方法分析了飼糧中不同劑量VE對種雞蛋黃及組織中α-T沉積量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(1)對樣品以甲醇提取后超聲處理20min的預(yù)處理方法，操作簡單，α-T損失少，提取效率明顯高于皂化法和甲醇提取后室溫靜置12h的方法，在所考察的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，r為0.9999，20℃浸提10h加標(biāo)回收率在100.8％～109.00％;(2)隨VE添加量的增加，蛋黃、肝臟、心臟中α-生育

5、酚含量呈線性增加，添加320mg/kg濃度達(dá)到最大，而腎臟沉積增加不明顯。
　　 試驗(yàn)三研究VE對種母雞OVR基因表達(dá)的影響，并對OVR基因表達(dá)量與卵黃的VE沉積、生產(chǎn)性能及繁殖性能進(jìn)行了回歸分析。結(jié)果:成功擴(kuò)增出種母雞卵泡OVR基因片段，大小約110bp;對于OVR mRNA的表達(dá)量，40、80 mg/kg添加組(Ⅲ、Ⅳ組)較對照組顯著升高（P＜0.05），而160和320 mg/kg（Ⅴ、Ⅵ組）添加組表達(dá)量反而降低;OVR基

6、因的表達(dá)量與蛋黃VE沉積量、受精率和初生重之間呈倒數(shù)關(guān)系（P＜0.05）。
　　 試驗(yàn)四研究了VE對種母雞等級前卵泡顆粒細(xì)胞增殖的影響。通過對種母雞顆粒細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的生長趨勢和增殖情況，并在此基礎(chǔ)上研究VE對顆粒細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)的適應(yīng)期為24h，72h達(dá)到高峰，之后細(xì)胞進(jìn)入停滯期。(2)48h內(nèi)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，各組細(xì)胞增殖率隨VE濃度的增加而升高，48h時(shí)達(dá)到高峰，之后增殖

7、率開始下降，培養(yǎng)至72h，10 mg/L組維持較高的細(xì)胞數(shù)量，250 mg/L組的細(xì)胞增殖率變?yōu)樨?fù)值，即開始抑制細(xì)胞生長，其他各組隨著添加劑量的升高有顯著的降低。
　　 試驗(yàn)五研究了不同濃度VE對種母雞卵泡顆粒細(xì)胞無血清培養(yǎng)所致細(xì)胞凋亡的影響。在試驗(yàn)四的基礎(chǔ)上，觀察對種母雞顆粒細(xì)胞的增殖作用最明顯的10 mg/L濃度VE對種母雞卵泡顆粒細(xì)胞氧化損傷和凋亡的保護(hù)作用，以流式細(xì)胞儀檢測顆粒細(xì)胞的凋亡情況和細(xì)胞周期變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):VE