黃瓜韌皮液中的mRNA和蛋白質(zhì)對(duì)油菜素內(nèi)酯的響應(yīng)研究.pdf

1、油菜素內(nèi)酯(BRs)是一種新型的類甾醇激素，除了在植物生長(zhǎng)發(fā)育方面起重要的作用外，在植物對(duì)生物和非生物逆境的抗逆反應(yīng)調(diào)控中扮演著重要的角色。研究蔬菜等農(nóng)作物韌皮液中的基因、蛋白等物質(zhì)對(duì)BRs的響應(yīng)不僅對(duì)于揭示植物地上部和地下部間通過信號(hào)通訊協(xié)同植物生長(zhǎng)、發(fā)育、抗逆等反應(yīng)的機(jī)制具有重要的理論意義，而且對(duì)于蔬菜作物生長(zhǎng)發(fā)育及抗性調(diào)控途徑的探索也具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。 本文以主要設(shè)施蔬菜黃瓜為研究對(duì)象，從韌皮液mRNA和蛋白質(zhì)物質(zhì)的運(yùn)輸

2、著手，通過結(jié)合利用消減雜交技術(shù)(SSH)和RT-PCR(Real-Time PCR)技術(shù)，從黃瓜韌皮液中克隆獲得了一系列黃瓜代謝途徑中對(duì)表油菜素內(nèi)酯(EBR)響應(yīng)的關(guān)鍵基因；研究還從蛋白質(zhì)組學(xué)方面，利用2D-PAGE技術(shù)進(jìn)一步研究了響應(yīng)EBR的黃瓜韌皮蛋白，并就EBR對(duì)黃瓜生長(zhǎng)發(fā)育及抗性的影響機(jī)制進(jìn)行了探討。所取得的主要結(jié)果如下： 1)在EBR對(duì)黃瓜韌皮液RNA轉(zhuǎn)錄本影響的研究過程中，構(gòu)建了黃瓜韌皮液受EBR處理之后的消減抑制雜

3、交(SSH)文庫(kù)，共獲得650個(gè)克隆，隨機(jī)260個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序分析，得到28個(gè)獨(dú)立基因，根據(jù)BLASTX分析推測(cè)這些基因編碼的蛋白功能，可以分為能量與光合作用，運(yùn)輸通道，蛋白合成，細(xì)胞骨架，細(xì)胞分裂和分化，激素響應(yīng)及逆境調(diào)控和其它相關(guān)的7大類，其中參與脅迫響應(yīng)的基因占較大比例，表明EBR誘導(dǎo)了抗性相關(guān)基因，生長(zhǎng)素和茉莉酸響應(yīng)基因在SSH文庫(kù)中出現(xiàn)，表明EBR可能與其它植物生長(zhǎng)物質(zhì)互作。 2)EBR處理黃瓜葉片6h后，編碼C60、

4、C453、C568、C68l、C579、C594、C564、 C623、 C637、 C420等基因的表達(dá)均上調(diào)，說(shuō)明EBR促進(jìn)了這些基因的表達(dá)。 3)韌皮蛋白雙向凝膠電泳結(jié)果表明EBR處理葉片6 h后，韌皮液中蛋白組成發(fā)生了明顯的改變，28 KDa蛋白點(diǎn)表達(dá)明顯高于對(duì)照，另外三個(gè)蛋白點(diǎn)(60KDa、75 KDa、95 KDa)則明顯弱于對(duì)照，說(shuō)明EBR可能影響了相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)或抑制了蛋白的合成并通過韌皮部運(yùn)輸?shù)狡渌鞴佟?/p>