黃瓜韌皮液中的mRNA和蛋白質對油菜素內酯的響應研究.pdf

1、油菜素內酯(BRs)是一種新型的類甾醇激素，除了在植物生長發(fā)育方面起重要的作用外，在植物對生物和非生物逆境的抗逆反應調控中扮演著重要的角色。研究蔬菜等農作物韌皮液中的基因、蛋白等物質對BRs的響應不僅對于揭示植物地上部和地下部間通過信號通訊協(xié)同植物生長、發(fā)育、抗逆等反應的機制具有重要的理論意義，而且對于蔬菜作物生長發(fā)育及抗性調控途徑的探索也具有一定的現(xiàn)實意義。 本文以主要設施蔬菜黃瓜為研究對象，從韌皮液mRNA和蛋白質物質的運輸

2、著手，通過結合利用消減雜交技術(SSH)和RT-PCR(Real-Time PCR)技術，從黃瓜韌皮液中克隆獲得了一系列黃瓜代謝途徑中對表油菜素內酯(EBR)響應的關鍵基因；研究還從蛋白質組學方面，利用2D-PAGE技術進一步研究了響應EBR的黃瓜韌皮蛋白，并就EBR對黃瓜生長發(fā)育及抗性的影響機制進行了探討。所取得的主要結果如下： 1)在EBR對黃瓜韌皮液RNA轉錄本影響的研究過程中，構建了黃瓜韌皮液受EBR處理之后的消減抑制雜

3、交(SSH)文庫，共獲得650個克隆，隨機260個克隆進行測序分析，得到28個獨立基因，根據BLASTX分析推測這些基因編碼的蛋白功能，可以分為能量與光合作用，運輸通道，蛋白合成，細胞骨架，細胞分裂和分化，激素響應及逆境調控和其它相關的7大類，其中參與脅迫響應的基因占較大比例，表明EBR誘導了抗性相關基因，生長素和茉莉酸響應基因在SSH文庫中出現(xiàn)，表明EBR可能與其它植物生長物質互作。 2)EBR處理黃瓜葉片6h后，編碼C60、

4、C453、C568、C68l、C579、C594、C564、 C623、 C637、 C420等基因的表達均上調，說明EBR促進了這些基因的表達。 3)韌皮蛋白雙向凝膠電泳結果表明EBR處理葉片6 h后，韌皮液中蛋白組成發(fā)生了明顯的改變，28 KDa蛋白點表達明顯高于對照，另外三個蛋白點(60KDa、75 KDa、95 KDa)則明顯弱于對照，說明EBR可能影響了相關基因的表達，促進或抑制了蛋白的合成并通過韌皮部運輸到其他器官。