TGF-β1小干擾RNA對(duì)肝癌HepG-,2-細(xì)胞株耐藥性逆轉(zhuǎn)的研究.pdf

1、目的：探討TGF-β1 siRNA表達(dá)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞株耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用。 方法：采用順鉑IC<,50>值1/5濃度培養(yǎng)HepG<,2>細(xì)胞3d、5d、7d，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。根據(jù)TGF-β1基因的編碼區(qū)域設(shè)計(jì)了含23個(gè)基因的TGF-β1基因特異性siRNA，脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染入分別培養(yǎng)3d、5d、7d的HepG<,2>/CDDP細(xì)胞。RT-PCR分析TGF-β1 mRNA的表達(dá)；MTT法分析轉(zhuǎn)染前后HepG<,2>/C

2、DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的藥物敏感性改變；免疫組化法分析TGF-β1以及P-糖蛋白(P-gp)的表達(dá)情況。 結(jié)果：建立了HepG<,2>/CDDP動(dòng)態(tài)的耐藥模型，流式細(xì)胞儀分析顯示HepG<,2>/CDDP細(xì)胞停留于G0/G1期；TGF-β1特異性siRNA轉(zhuǎn)染后，HepG<,2>/CDDP細(xì)胞的TGF-β1 mRNA、TGF-β1蛋白及P-gp表達(dá)明顯減少，對(duì)順鉑的敏感性增強(qiáng)；培養(yǎng)3d、5d的HepG<,2>/CDDP細(xì)胞組P-gp表