RNA干擾C1QBP表達逆轉絨癌化療耐藥性的研究.pdf

1、背景和目的:絨癌是發(fā)生于育齡女性的高度惡性實體瘤,對化療敏感。發(fā)生化療耐藥是其治療失敗的主要原因。深入了解絨癌耐藥機制以逆轉絨癌耐藥具有重要臨床意義。自噬是細胞應對代謝壓力的重要分解反應,降解細胞中去折疊或聚合的蛋白和細胞器等大分子物質,維持細胞內穩(wěn)態(tài),與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。有研究證實自噬促進腫瘤細胞對化療耐藥,抑制自噬可能逆轉腫瘤耐藥。C1QBP是一種多功能蛋白,本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)C1QBP在絨癌耐藥細胞株中表達高于敏感細

2、胞株,并以調節(jié)細胞自噬的方式參與絨癌耐藥,沉默C1QBP表達可能作為自噬的抑制子用于逆轉絨癌耐藥。本研究擬探討C1QBP與蛋白降解及選擇性自噬的關系,并通過動物實驗進一步探討C1QBP參與絨癌耐藥的相關機制。
　　 研究方法:構建靶向C1QBP基因的shRNA慢病毒表達載體,慢病毒穩(wěn)定轉染絨癌耐藥細胞干擾C1QBP表達；蛋白免疫印跡法(western blot)檢測C1QBP RNA干擾效率；CCK-8法檢測干擾C1QBP前后絨

3、癌耐依托泊苷(VP16)耐藥細胞株Jeg3/VPC IC50及耐藥指數(shù)(RI)的變化；行細胞裸鼠皮下成瘤,腹腔注射MTX或VP16,觀察腫瘤體積和重量變化,構建絨癌體內化療耐藥動物模型,檢驗沉默C1QBP表達對絨癌細胞體內耐藥性的影響；并同時在細胞和裸鼠皮下移植瘤組織中檢測自噬特異性受體蛋白p62與C1QBP的共表達。
　　 研究結果:成功構建C1QBP shRNA慢病毒表達載體并轉染絨癌耐藥細胞株Jeg3/VPc,獲得C1QB

4、P RNAi高效抑制的細胞,基因沉默效率隨細胞傳代遞減;沉默Jeg3/VPCC1QBP表達顯著降低細胞VP16 IC50及RI(P<0.05),其耐藥性下降比例達92.86％；C1QBP基因敲除(Knock down,KD)組細胞在裸鼠體內成瘤延遲,與對照組細胞相比C1QB KD組細胞VP16作用后體積抑瘤率和重量抑瘤率均升高；在體外培養(yǎng)細胞中,沉默C1QBP表達伴隨p62表達上調,且P62結構表型發(fā)生變化；裸鼠皮下移植瘤組織中均檢測出