微珠芯片集成檢測技術在冠心病早期預警中的應用.pdf

1、自20世紀后半葉以來,心腦血管疾病尤其是冠心病己成為全球性致殘與致死的最主要疾病,是危害人類健康的“第一殺手”。同樣的,隨著我國人民生活水平的提高和膳食結構的不合理,冠心病的發(fā)病率逐年上升并呈現年輕化趨勢,嚴重危害人們的健康。因此對冠心病做出早期診斷并進行相應的干預,意義重大。目前診斷冠心病的“金標準”是冠狀動脈造影。盡管冠狀動脈造影可以很直觀的了解冠狀動脈病變的程度和范圍,但其作為一種有創(chuàng)性檢查有一定的風險,且花費較大,不便于作為診斷

2、常規(guī)檢查乃至于體檢項目推廣。因此有必要尋找一種簡單快捷的冠心病診斷方法。
　　 冠心病是由多種致病因素作用于不同環(huán)節(jié)所致的多病因疾病,目前已有八種蛋白因子被認為是冠心病的獨立危險因素,但沒有哪一種標志物可以單獨預測冠心病事件的發(fā)生,而臨床上常用的檢測方法大部分只能檢測單一結構的物質。單個指標的檢測存在敏感性和特異性較低,容易出現漏診和誤診等問題,其對冠心病的預測價值較為局限,因此需要一種集成檢測方法。
　　 微珠芯片技術

3、是新興的蛋白質芯片技術,該方法被認為是醫(yī)學檢驗發(fā)展的方向。微珠芯片本質是流式細胞和酶標檢測兩種成熟技術有機整合,由于利用微珠在溶液中反應,克服了片膜芯片在大分子檢測時受表面張力、空間效應等對反應動力學的影響,同時利用激光檢測技術,大大提高了樣品檢測的準確性和重復性,使其既具有以往片膜芯片高通量的特性,又具有優(yōu)于片膜芯片的操作簡便、重復性好、靈敏度高和動態(tài)范圍寬等特點。目前已廣泛用于基因表達、基因分型、單抗篩選,以及細胞因子、腫瘤標記物、

4、內分泌、過敏原、遺傳病、環(huán)境與生物防御、傳染病檢測等領域。2001年12月美國FDA已批準xMAP微珠芯片技術用于臨床進行自身免疫病、人類白細胞抗原分型的診斷,這是唯一被美國FDA批準用于臨床診斷的生物芯片產品。
　　 目的：
　　 1、探討利用微珠芯片集成檢測三種冠心病相關蛋白因子(超敏C反應蛋白(hs-CRP)、脂蛋白(a)[Lp(a)]和脂聯素(APN))的可行性。
　　 2、探討hs-CRP、Lp(a)和

5、APN與冠心病的關系。
　　 對象與方法
　　 1、對象
　　 入選疑診為冠心病并初次行冠狀動脈造影檢查的患者共180例,其中男性123例,女性57例,平均年齡(61.7±10.6)歲。合并高血壓患者96例,糖尿病患者32例,吸煙患者65例。取外周血5ml并分離出血清,-80℃冰箱凍存。
　　 2、方法
　　 2.1所有入選病例均行冠狀動脈造影檢查,根據冠狀動脈造影檢查結果并結合臨床癥狀、心電圖及

6、心肌酶譜的變化分為對照組與冠心病組,其中冠心病組又分為穩(wěn)定型心絞痛(SAP)和急性冠脈綜合征(ACS)兩個亞組。同時計算每個患者的冠狀動脈狹窄Gensini積分。
　　 2.2嚴格登記入選病例一般資料:年齡、性別、吸煙及其他危險因素、疾病危險分層和一般實驗室檢查結果。
　　 2.3建立定量多重檢測包括hs-CRP、Lp(a)和APN在內的三種重要冠心病相關蛋白因子的微珠芯片集成檢測方法。
　　 2.4利用建立的微

7、珠芯片集成檢測方法檢測入選病例血清標本中hs-CRP、Lp(a)和APN等的含量,并與ELISA法的檢測結果進行對比。
　　 2.4比較不同組的hs-CRP、Lp(a)和APN等三種蛋白因子的差異,探討它們與冠心病的關系。
　　 2.5對三種蛋白因子與冠心病作Logistic回歸分析,探討微珠芯片集成檢測對冠心病的診斷意義。
　　 3、統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,實驗結果計量資料以均數±

8、標準差((χ)±s)表示,計數資料以頻數表示。計數資料多組間差異比較采用χ2檢驗,組間多重比較采用Bonferroni法。正態(tài)分布計量資料多組間差異比較經方差齊性檢驗后采用one-wayANOVA,組間多重比較采用LSD法。偏態(tài)分布或方差不齊的計量資料采用非參數檢驗,多組間差異比較采用Krushal-WallisH檢驗,組間多重比較采用Bonferroni法。偏態(tài)資料雙變量相關性采用Spearman相關分析。回歸分析采用二分類Logis

9、tic回歸分析。P≤0.05認為有顯著性差異。
　　 結果
　　 1、不同組間一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 2、成功建立了微珠芯片三種蛋白因子集成檢測模型。
　　 3、微珠芯片與ELISA兩種方法檢測結果有良好的相關性(hs-CRP:Spearman相關系數rs=0.924,P<0.001:Lp(a):rs=0.877,P<0.001；APN:rs=0.845,P<0.001)。
　　

10、4、hs-CRP、Lp(a)、APN在不同組中差異具有顯著性意義(P　　 5、三種蛋白因子與Gensini積分均有良好的相關性(hs

11、-CRP:Spearman相關系數rs=0.507,P<0.001；Lp(a):rs=0.19,P=0.011；APN:rs=-0.238,P=0.001)。
　　 6、三種蛋白同時與冠心病做Logistic回歸分析得到方程:Y=0.216+0.5X1+0.002X2-0.048X3,P<0.001,判對率為75.6％。
　　 結論
　　 1、建立了可同時檢測包括hs-CRP、Lp(a)和APN在內的三種冠心病相

12、關蛋白因子的微珠芯片定量檢測方法。
　　 2、成功將微珠芯片技術用于冠心病相關蛋白因子的檢測,并證明了微珠芯片多因子定量檢測方法的可行性。
　　 3、利用微珠芯片集成檢測冠心病相關蛋白因子并對結果進行綜合分析有利于冠心病早期診斷。微珠芯片多因子定量檢測模型的建立,為進一步解決檢測技術達到準確、快速、簡便、多功能、多指標、高通量、標準化的要求奠定了基礎。
　　 4、hs-CRP是冠心病的獨立危險因素,可作為發(fā)生冠心