微珠芯片集成檢測(cè)技術(shù)在冠心病早期預(yù)警中的應(yīng)用.pdf

1、自20世紀(jì)后半葉以來(lái),心腦血管疾病尤其是冠心病己成為全球性致殘與致死的最主要疾病,是危害人類健康的“第一殺手”。同樣的,隨著我國(guó)人民生活水平的提高和膳食結(jié)構(gòu)的不合理,冠心病的發(fā)病率逐年上升并呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì),嚴(yán)重危害人們的健康。因此對(duì)冠心病做出早期診斷并進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù),意義重大。目前診斷冠心病的“金標(biāo)準(zhǔn)”是冠狀動(dòng)脈造影。盡管冠狀動(dòng)脈造影可以很直觀的了解冠狀動(dòng)脈病變的程度和范圍,但其作為一種有創(chuàng)性檢查有一定的風(fēng)險(xiǎn),且花費(fèi)較大,不便于作為診斷

2、常規(guī)檢查乃至于體檢項(xiàng)目推廣。因此有必要尋找一種簡(jiǎn)單快捷的冠心病診斷方法。
　　 冠心病是由多種致病因素作用于不同環(huán)節(jié)所致的多病因疾病,目前已有八種蛋白因子被認(rèn)為是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,但沒(méi)有哪一種標(biāo)志物可以單獨(dú)預(yù)測(cè)冠心病事件的發(fā)生,而臨床上常用的檢測(cè)方法大部分只能檢測(cè)單一結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。單個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)存在敏感性和特異性較低,容易出現(xiàn)漏診和誤診等問(wèn)題,其對(duì)冠心病的預(yù)測(cè)價(jià)值較為局限,因此需要一種集成檢測(cè)方法。
　　 微珠芯片技術(shù)

3、是新興的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),該方法被認(rèn)為是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展的方向。微珠芯片本質(zhì)是流式細(xì)胞和酶標(biāo)檢測(cè)兩種成熟技術(shù)有機(jī)整合,由于利用微珠在溶液中反應(yīng),克服了片膜芯片在大分子檢測(cè)時(shí)受表面張力、空間效應(yīng)等對(duì)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響,同時(shí)利用激光檢測(cè)技術(shù),大大提高了樣品檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,使其既具有以往片膜芯片高通量的特性,又具有優(yōu)于片膜芯片的操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、靈敏度高和動(dòng)態(tài)范圍寬等特點(diǎn)。目前已廣泛用于基因表達(dá)、基因分型、單抗篩選,以及細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)記物、

4、內(nèi)分泌、過(guò)敏原、遺傳病、環(huán)境與生物防御、傳染病檢測(cè)等領(lǐng)域。2001年12月美國(guó)FDA已批準(zhǔn)xMAP微珠芯片技術(shù)用于臨床進(jìn)行自身免疫病、人類白細(xì)胞抗原分型的診斷,這是唯一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于臨床診斷的生物芯片產(chǎn)品。
　　 目的：
　　 1、探討利用微珠芯片集成檢測(cè)三種冠心病相關(guān)蛋白因子(超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、脂蛋白(a)[Lp(a)]和脂聯(lián)素(APN))的可行性。
　　 2、探討hs-CRP、Lp(a)和

5、APN與冠心病的關(guān)系。
　　 對(duì)象與方法
　　 1、對(duì)象
　　 入選疑診為冠心病并初次行冠狀動(dòng)脈造影檢查的患者共180例,其中男性123例,女性57例,平均年齡(61.7±10.6)歲。合并高血壓患者96例,糖尿病患者32例,吸煙患者65例。取外周血5ml并分離出血清,-80℃冰箱凍存。
　　 2、方法
　　 2.1所有入選病例均行冠狀動(dòng)脈造影檢查,根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影檢查結(jié)果并結(jié)合臨床癥狀、心電圖及

6、心肌酶譜的變化分為對(duì)照組與冠心病組,其中冠心病組又分為穩(wěn)定型心絞痛(SAP)和急性冠脈綜合征(ACS)兩個(gè)亞組。同時(shí)計(jì)算每個(gè)患者的冠狀動(dòng)脈狹窄Gensini積分。
　　 2.2嚴(yán)格登記入選病例一般資料:年齡、性別、吸煙及其他危險(xiǎn)因素、疾病危險(xiǎn)分層和一般實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。
　　 2.3建立定量多重檢測(cè)包括hs-CRP、Lp(a)和APN在內(nèi)的三種重要冠心病相關(guān)蛋白因子的微珠芯片集成檢測(cè)方法。
　　 2.4利用建立的微

7、珠芯片集成檢測(cè)方法檢測(cè)入選病例血清標(biāo)本中hs-CRP、Lp(a)和APN等的含量,并與ELISA法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
　　 2.4比較不同組的hs-CRP、Lp(a)和APN等三種蛋白因子的差異,探討它們與冠心病的關(guān)系。
　　 2.5對(duì)三種蛋白因子與冠心病作Logistic回歸分析,探討微珠芯片集成檢測(cè)對(duì)冠心病的診斷意義。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)量資料以均數(shù)±

8、標(biāo)準(zhǔn)差((χ)±s)表示,計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示。計(jì)數(shù)資料多組間差異比較采用χ2檢驗(yàn),組間多重比較采用Bonferroni法。正態(tài)分布計(jì)量資料多組間差異比較經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后采用one-wayANOVA,組間多重比較采用LSD法。偏態(tài)分布或方差不齊的計(jì)量資料采用非參數(shù)檢驗(yàn),多組間差異比較采用Krushal-WallisH檢驗(yàn),組間多重比較采用Bonferroni法。偏態(tài)資料雙變量相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。回歸分析采用二分類Logis

9、tic回歸分析。P≤0.05認(rèn)為有顯著性差異。
　　 結(jié)果
　　 1、不同組間一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、成功建立了微珠芯片三種蛋白因子集成檢測(cè)模型。
　　 3、微珠芯片與ELISA兩種方法檢測(cè)結(jié)果有良好的相關(guān)性(hs-CRP:Spearman相關(guān)系數(shù)rs=0.924,P<0.001:Lp(a):rs=0.877,P<0.001；APN:rs=0.845,P<0.001)。
　　

10、4、hs-CRP、Lp(a)、APN在不同組中差異具有顯著性意義(P　　 5、三種蛋白因子與Gensini積分均有良好的相關(guān)性(hs

11、-CRP:Spearman相關(guān)系數(shù)rs=0.507,P<0.001；Lp(a):rs=0.19,P=0.011；APN:rs=-0.238,P=0.001)。
　　 6、三種蛋白同時(shí)與冠心病做Logistic回歸分析得到方程:Y=0.216+0.5X1+0.002X2-0.048X3,P<0.001,判對(duì)率為75.6％。
　　 結(jié)論
　　 1、建立了可同時(shí)檢測(cè)包括hs-CRP、Lp(a)和APN在內(nèi)的三種冠心病相

12、關(guān)蛋白因子的微珠芯片定量檢測(cè)方法。
　　 2、成功將微珠芯片技術(shù)用于冠心病相關(guān)蛋白因子的檢測(cè),并證明了微珠芯片多因子定量檢測(cè)方法的可行性。
　　 3、利用微珠芯片集成檢測(cè)冠心病相關(guān)蛋白因子并對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析有利于冠心病早期診斷。微珠芯片多因子定量檢測(cè)模型的建立,為進(jìn)一步解決檢測(cè)技術(shù)達(dá)到準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、多功能、多指標(biāo)、高通量、標(biāo)準(zhǔn)化的要求奠定了基礎(chǔ)。
　　 4、hs-CRP是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,可作為發(fā)生冠心