懸浮芯片集成檢測(cè)技術(shù)在急性冠脈綜合征早期預(yù)警中的應(yīng)用.pdf

1、急性冠脈綜合征(ACS)是由于動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定,斑塊出現(xiàn)潰瘍、破裂,最后導(dǎo)致血栓的形成而引起的一組嚴(yán)重的急性缺血性心臟病,包括不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)、非 ST 段抬高心肌梗死(non-ST elevationinfarction,NSTEMI)和ST 段抬高心肌梗死(ST elevation infarction,STEMI)和心源性猝死,相對(duì)于穩(wěn)定心絞痛患者比較而言,其臨床特點(diǎn)是病

2、情發(fā)生發(fā)展快,往往缺少心要的保護(hù)措失,死亡率高,預(yù)后及轉(zhuǎn)歸難以預(yù)料,嚴(yán)重危害了人們的健康。所以對(duì)其做出早期珍斷并進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù),意義非常重大。實(shí)施冠狀動(dòng)脈造影檢查可以比較直觀的了解冠狀動(dòng)脈病變的程度和范圍,但作為一種有創(chuàng)性檢查,它有著有一定的風(fēng)險(xiǎn),且花費(fèi)較大,不能作為診斷的常規(guī)檢查。因此有必要尋找一種簡(jiǎn)單快捷的診斷方法。
　　 ACS 是由多種致病因素作用于不同環(huán)節(jié)所致的多病因疾病,公認(rèn)的致病危險(xiǎn)包括吸煙、肥胖、高血壓等,但這些

3、因素仍不能完全解釋冠心病的成因及其嚴(yán)重程度。近年來(lái)一些新的冠心病危險(xiǎn)因素逐漸受到人們的關(guān)注,目前證據(jù)表明炎癥反應(yīng)是動(dòng)脈粥樣硬化形成和發(fā)展過(guò)程中的相關(guān)因素之一,研究也證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中存在持續(xù)的炎癥反應(yīng),急性炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的冠脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性是ACS發(fā)生的重要病理機(jī)制之一,而且與冠心病的嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān)。因此炎性因子可能作為一類標(biāo)記物,可以預(yù)測(cè)冠脈病變潛在的危險(xiǎn)程度。易損斑塊的研究是當(dāng)今 ACS 研究的熱點(diǎn),主要是指不穩(wěn)定和有血

4、栓形成傾向的斑塊,包括破裂斑塊、侵蝕性斑塊和部分鈣化性結(jié)節(jié)病變。炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致冠脈內(nèi)結(jié)構(gòu)性易損斑塊向功能性易損斑塊進(jìn)展的重要環(huán)節(jié)。
　　 懸浮芯片檢測(cè)技術(shù)是新興的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),該方法得利于光電轉(zhuǎn)換及數(shù)字信號(hào)處理技術(shù)的進(jìn)步。懸浮是反應(yīng)的載體,利用懸浮在溶液中反應(yīng),克服了片膜芯片在大分子檢測(cè)時(shí)受表面張力、空間效應(yīng)等對(duì)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響以及在探針點(diǎn)樣時(shí)容易發(fā)生點(diǎn)樣錯(cuò)誤、耗時(shí)、平行等量加樣困難、加樣頭反復(fù)加樣易發(fā)生樣本間污染、重復(fù)性差等

5、缺點(diǎn)。同時(shí)利用激光檢測(cè)技術(shù),識(shí)別編碼懸浮及生物學(xué)反應(yīng)后的熒光信號(hào),具有高通量操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、靈敏度高和動(dòng)態(tài)范圍寬等特點(diǎn)。目前已廣泛用于于組縱配型、遺傳疾病的診斷、癌基因檢測(cè)、外源性病原體的檢測(cè)、SNP 和mRNA/cDNA表達(dá)的檢測(cè)等領(lǐng)域。
　　 目的
　　 檢測(cè)急性冠脈綜合征(ACS)患者血中超敏 C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、脂蛋白a(Lp a)及脂聯(lián)素(APN)3種蛋白因子的濃度并探討其臨床意義。
　　

6、 對(duì)象與方法
　　 1、對(duì)象
　　 入選珠江醫(yī)院心內(nèi)科2008年3月至2008年12月診斷為急性冠脈綜合征的患者96例(其中急性心?；颊?4例,不穩(wěn)定心絞痛患者32例),男性60例,女性36例,平均年齡(63.11±10.84)歲。對(duì)照組選取按2000年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)及美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)(AHA)的診斷和命名標(biāo)準(zhǔn)診斷為穩(wěn)定型心絞痛患者 30例為對(duì)照,男性18例,女性12例,平均年齡(59.86±10.54)歲；另設(shè)

7、正常對(duì)照組(NC)40 例,為同期門診的健康體檢者,男性17例,女性23例,平均年齡(62.02±10.11)歲經(jīng)64 排 CT 或冠脈造影檢查證實(shí)無(wú)有意義的狹窄血管。所有對(duì)象均取外周血 5ml 并分離出血清,-80℃冰箱凍存。
　　 2、方法
　　 2.1 所有入選ACS組患者在無(wú)禁忌癥的情況下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的冠心病二級(jí)預(yù)防,均接受急診或擇期冠狀動(dòng)脈造影,并行適宜的血運(yùn)重建。術(shù)后一般給阿司匹林、氯毗格雷、肝素三聯(lián)抗血小板抗凝

8、或加用替羅非班四聯(lián)治療。
　　 2.2 嚴(yán)格登記入選病例一般資料:年齡、性別、體重、吸煙以及其他危險(xiǎn)因素、疾病危險(xiǎn)分層和一般實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。
　　 2.3 入選 ACS 組患者近期心血管事件的隨訪,如性心律失常、心功能不全、腦卒中、再梗/再發(fā)心絞痛、心源性死亡等。
　　 2.4 建立定量多重檢測(cè)包括 hs-CRP、Lp(a)和APN 在內(nèi)的三種重要冠心病相關(guān)蛋白因子的懸浮芯片集成檢測(cè)方法。
　　 2.5

9、利用建立的懸浮芯片集成檢測(cè)方法檢測(cè)入選病例血清標(biāo)本中hs-CRP、Lp(a)和APN等的含量,并與ELISA 法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
　　 2.6 比較不同組的hs-CRP、Lp(a)和APN等三種蛋白因子水平的差異.
　　 2.7 比較 hs-CRP、Lp(a)和APN在急性冠脈綜合征患者不同預(yù)后組之間的差異,比與其預(yù)后做相關(guān)分析。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 應(yīng)用SPSS 13.0的統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)

10、統(tǒng)計(jì),正態(tài)分布計(jì)量數(shù)據(jù)以 X±s表示；非正態(tài)計(jì)量資料以中位數(shù)表示:計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示,計(jì)數(shù)資料組間差異采用 x2 檢驗(yàn)。正態(tài)分布計(jì)量資料差異經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后以 one-way ANOVA法比較,組間多重比較采用 LSD法。偏態(tài)分布或方差不齊的計(jì)量資料采用非參數(shù)檢驗(yàn),組間差異比較采用Krushal-Wallis H檢驗(yàn),組間多重比較采用 Neminyi Test。偏態(tài)資料雙變量相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。多因素預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征患

11、者預(yù)后采用logistic回歸分析,P≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1、不同組間一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、懸浮芯片與ELISA兩種方法檢測(cè)結(jié)果有良好的相關(guān)性(hs-CRP:Spearman相關(guān)系數(shù) rs=0.934,P<0.001；Lp(a):rs=0.909,P<0.001；APN:rs=0.843,P<0.001)。
　　 3、ACS 組血清hs-CRP 及Lp

12、(a)濃度明顯高于SAP組及NC組(P均<0.05),APN 濃度明顯低于SAP組及NC組(P 均<0.05),其中AMI 亞組預(yù)后不良患者CRP及Lp(a)濃度均大于UAP組預(yù)后較好患者,APN濃度明顯低于 UAP 組預(yù)后較好患者(P均<0.001)。
　　 4、SAP組與NC組相比,hs-CRP,Lp(α)水平均高于NC組(P均<0.05),APN濃度則于NC組無(wú)顯著差異性(P>0.05).
　　 5、AMI及UAP

13、短期內(nèi)及遠(yuǎn)期預(yù)后不良的患者血清CRP及 Lp(a)濃度均高于單純AMI及UAP組,APN則分別低于單純AMI及UAP組,差異具有顯著性(P均<0.05)。
　　 6、3 種蛋白因子與急性冠脈綜合征近期預(yù)后的回歸分析:回歸方程為y=-10.307+1.556x1+0.234x2+0.003x3-0.292x4,方程判對(duì)率為 96.9％hs-CRP,偏回歸系數(shù) 0.234,標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù) 0.09,P<0.01,OR 值 1.264；

14、LP(a),偏回歸系數(shù) 0.003,標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)0.001,P<0.05,OR 值 1.003；APN,偏回歸系數(shù)-0.292,標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)0.122,P<0.05,OR 值 0.746),3種蛋白因子與急性冠脈綜合征近期及遠(yuǎn)期預(yù)后的回歸分析,回歸方程為y=-0.47+0.087x1-0.068x2,方程判對(duì)率為 75.0％。(hs-CRP,偏回歸系數(shù) 0.087,標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù) 0.026,P<0.01,OR 值 1.091；APN,偏

15、回歸系數(shù)-0.068,標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù) 0.029,P<0.01,OR 值 0.934)。
　　 結(jié)論
　　 1、各組研究對(duì)象年齡、性別、體重等一般情況無(wú)顯著差異性。
　　 2、建立了可同時(shí)檢測(cè)包括 hs-CRP、Lp(a)和APN 在內(nèi)的三種冠心病相關(guān)蛋白因子的懸浮芯片定量檢測(cè)方法。
　　 3、成功將懸浮芯片技術(shù)用于急性冠脈綜合征相關(guān)蛋白因子的檢測(cè),并證明了懸浮芯片多因子定量檢測(cè)方法的可行性。
　　

16、 4、利用懸浮芯片集成檢測(cè)急性冠脈綜合征相關(guān)蛋白因子有利于急性冠脈綜合征早期診斷,并且結(jié)果更準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便,為多功能、多指標(biāo)、高通量、標(biāo)準(zhǔn)化的要求奠定了基礎(chǔ)。
　　 5、hs-CRP、Lp(a)是急性炎癥的重要標(biāo)志物,是急性冠脈綜合征的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,參于了動(dòng)脈粥樣斑塊內(nèi)炎性活動(dòng),且在ACS預(yù)后不良組兩者水平均明顯高于預(yù)后較好者,因此可作為發(fā)生 ACS 危險(xiǎn)及其預(yù)后的重要預(yù)報(bào)因子。APN 水平則明顯低于正常對(duì)照組及穩(wěn)定型心絞痛組