逍遙丸對高脂飲食誘導(dǎo)大鼠空腹血糖受損的影響及其機制研究.pdf

1、[背景]
　　 糖調(diào)節(jié)受損(IGR)，也稱糖尿病前期，是指血糖升高但尚未達到糖尿病診斷標準，包括空腹血糖受損(IFG)和糖耐量受損(IGT)。近年來，糖尿病及糖尿病前期的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。最新流行病學調(diào)查結(jié)果顯示，我國的糖尿病患病率達9.7％，糖尿病前期高達15.5％。研究表明，在3-5年觀察期間，不給予任何干預(yù)措施，約有25％的IFG和IGT進展為糖尿病，50％停留在原階段，剩下25％逆轉(zhuǎn)為正常血糖。糖尿病是發(fā)生心腦血管事

2、件的高風險因素已經(jīng)得到共識，近年來IGR引起大血管病變?nèi)找媸艿疥P(guān)注。血糖維持在IGT和IFG狀態(tài)，不易發(fā)生糖尿病微血管病變，但大血管發(fā)生病變的危險性顯著增加。IFG和IGT可導(dǎo)致冠狀動脈、頸動脈以及外周動脈的粥樣硬化程度加重，從而導(dǎo)致心血管事件的發(fā)生率顯著增加。因此，對IGR進行干預(yù)和治療，對防治各種代謝性疾病如糖尿病、代謝綜合征、心血管疾病等具有重要意義。
　　 隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活方式的改變，高脂飲食作為肥胖、2型糖

3、尿病及代謝綜合征等疾病發(fā)病的重要環(huán)境因素已得到公認。高脂飲食可使組織或循環(huán)中的血脂代謝異常，脂質(zhì)代謝紊亂對細胞具有毒性作用。脂毒性表現(xiàn)為血中游離脂肪酸(FFAs)水平增高或細胞內(nèi)脂肪的含量增多，超過脂肪組織的儲存能力和各組織對FFAs的氧化能力，過多的FFAs以三酰甘油(TG)的形式在胰島素作用的靶器官如脂肪組織、肌肉和肝臟中過度沉積造成胰島素抵抗，而在胰島中過多沉積可以使胰島β細胞出現(xiàn)功能障礙，胰島素抵抗和胰島β細胞功能障礙最終可引起

4、空腹血糖受損、糖耐量異常、糖尿病及代謝綜合征等疾病的發(fā)生。此外，由脂肪細胞分泌的脂肪細胞因子，如腫瘤壞死因子a(TNF-a)、脂聯(lián)素(Adiponectin)和瘦素(Leptin)等常常參與胰島素抵抗的發(fā)生，他們通過自分泌、內(nèi)分泌和神經(jīng)通路，對調(diào)節(jié)糖代謝和機體的能量平衡起著多方面的作用。
　　 目前IGR的治療藥物主要有雙胍類、a葡萄糖苷酶抑制劑以及胰島素增敏劑等。由于上述藥物可引起水腫、肝腎損害、胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)，使其應(yīng)用

5、受到一定的限制。中藥復(fù)方在改善糖調(diào)節(jié)受損方面具有一定優(yōu)勢和潛力，具有多環(huán)節(jié)、多靶點、且作用相對安全的特點。中醫(yī)認為糖調(diào)節(jié)受損多由飲食不節(jié)、倦怠少動、情志所傷等引起脾失健運，氣機不暢，氣郁化火，津液生痰，痰性黏滯，阻絡(luò)成瘀。病機特點為脾虛肝郁。逍遙丸源于逍遙散，始載于《太平惠民和劑局方》，由柴胡、白芍、白術(shù)、茯苓、當歸、甘草、生姜、薄荷八味藥物組成，為疏肝健脾的代表方?，F(xiàn)代藥理研究表明，逍遙丸具有保肝護胃、抗抑郁、改善脂蛋白及高黏血癥的作

6、用，廣泛應(yīng)用于肝膽病、胃腸病、神經(jīng)官能癥等疾病，但對于糖調(diào)節(jié)受損、糖尿病、代謝綜合征等疾病的應(yīng)用較少。
　　 本實驗通過高脂飲食誘導(dǎo)大鼠空腹血糖受損和糖耐量異常，模擬人類胰島素抵抗和糖調(diào)節(jié)受損的發(fā)病特點，建立糖調(diào)節(jié)受損大鼠模型，觀察逍遙丸對高脂飲食大鼠空腹血糖、糖耐量、血脂等實驗室指標的影響，探討逍遙丸對糖調(diào)節(jié)受損大鼠的治療作用及其機制，為擴大其臨床應(yīng)用提供實驗室依據(jù)。
　　 [目的]
　　 通過高脂飲食誘導(dǎo)大鼠

7、空腹血糖受損和糖耐量異常，建立糖調(diào)節(jié)受損大鼠模型，觀察逍遙丸對高脂飲食大鼠空腹血糖、糖耐量、血脂等實驗室指標的影響，探討逍遙丸對糖調(diào)節(jié)受損大鼠的治療作用及其機制。
　　 [方法]
　　 SPF級雄性Wistar大鼠40只，體質(zhì)量200～250g，按體質(zhì)量隨機分成四組，每組10只，分別為正常對照組、模型組、血脂康(對照)組、逍遙丸組。正常對照組給予基礎(chǔ)飼料(能量比:脂肪10％，碳水化合物67％，蛋白23％)，其余各組給予高

8、脂飼料(能量比:脂肪60％，碳水化合物20％，蛋白質(zhì)20％，每g高脂飼料可提供5.24kal能量)。對照組(血脂康組)按300mg/Kg/d的劑量灌胃給藥;逍遙散組按3g/Kg/d的劑量灌胃給藥，正常組和模型組灌等體積的生理鹽水，實驗周期為8周。每周稱取體重;實驗4、8周時測空腹血糖(FBG);實驗8周末，酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELISA)測定空腹血清胰島素(FINS)，計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);通過胰島素耐量試驗(ITT)試

9、驗評價胰島素敏感性;評價口服葡萄糖耐量(OGTT)試驗;檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。實驗結(jié)束時，每組大鼠隨機分為兩組，分別為腹腔注射胰島素組及未用胰島素處理組。腹腔注射胰島素(5IU/Kg)后15min處死大鼠，迅速取出肝臟，PBS沖洗干凈后，-80℃凍存。稱取各組大鼠腎周脂肪、附睪脂肪墊，并計算相對腎周脂肪重(腎周脂肪重量/體重×100％)及相對附

10、睪脂肪重(附睪脂肪重量/體重×100％);采用蛋白免疫印跡法(Westernblot)觀察胰島素處理組大鼠肝臟p-Aktser473表達的變化。
　　 統(tǒng)計學分析:數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，結(jié)果表示為:均數(shù)±標準差((X-)±S)。獨立樣本組間比較采用one-wayANOVA，方差齊時，多重比較采用LSD;方差不齊，總體比較采用Welch，多重比較采用Tambane'sT2法。重復(fù)測量數(shù)據(jù)用重復(fù)測量方差分析，滿足

11、球形檢驗者，采用SphericityAssumed法分析;不滿足球形檢驗者，采用Greenhouse-Geisser法分析。P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1、體重、相對腎周脂肪重及相對附睪脂肪重的變化
　　 從第2周起，各組體重總體有差異(F=6.536，P=0.001)，且時間因素與分組因素間存在交互效應(yīng)(F=10.982，P＜0.001)。與正常組相比，模型組大鼠體重增長快，從第2周到

12、實驗結(jié)束模型組的體重顯著高于正常組(P＜0.05)，相對腎周脂肪重及相對附睪脂肪重均顯著高于正常組(P＜0.05)。血脂康組和逍遙丸組體重增長均較模型組慢，實驗結(jié)束時體重均低于模型組，但沒有統(tǒng)計學差異(P值分別為:P=0.384;P=0.067)。與模型組相比，逍遙丸可顯著降低高脂大鼠相對腎周脂肪重及相對附睪脂肪重(P＜0.05)，血脂康組無顯著改善。
　　 2、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOM

13、A-IR)的變化
　　 實驗期間各組血糖總體有差異(F=4.474，P=0.010;F＝14.718，P＜0.001)，各組空腹胰島素、HOMA-IR總體有差異(F=8.858，P＜0.001;F=14.870，P＜0.001)。模型組大鼠在實驗第4周、第8周FBG顯著高于正常組(P＜0.05)，第8周末FINS水平、HOMA-IR指數(shù)較正常組顯著升高(P＜0.05)。與模型組相比，逍遙丸組在實驗第4周時FBG有下降的趨勢，但沒

14、有統(tǒng)計學差異(P=0.377)，在實驗第8周與模型組相比FBG、FINS均顯著降低(P＜0.05)，同時胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR也顯著低于模型組(P＜0.001)。血脂康組與模型組相比，F(xiàn)BG、FINS、HOMA-IR均無顯著下降(P值分別為:P=0.901;P=0.106;P=0.209;P=0.080)。
　　 3、胰島素耐量變化
　　 胰島素耐量試驗表明模型組大鼠血糖水平與同時間點正常組大鼠比較下降幅度減少(P

15、＜0.05)，曲線下面積顯著高于正常組(P=0.003)，呈現(xiàn)胰島素敏感性下降狀態(tài)。血脂康和逍遙丸組血糖水平與同時間點模型組大鼠相比下降幅度增大。與模型組相比，逍遙丸組90mim、120min血糖值有不同程度降低，曲線下面積減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血脂康組120min血糖值較模型組低(P=0.029)，曲線下面積與模型組比減少，但沒有統(tǒng)計學差異(P=0.310)。
　　 4、糖耐量變化
　　 與正常組相比

16、，糖負荷后模型組30、90及120分鐘血糖顯著升高(P＜0.05)，葡萄糖曲線下面積顯著高于正常組(P＜0.001)，出現(xiàn)糖耐量減退。逍遙丸和血脂康組糖負荷后30、60、90及120min各時間點血糖值與模型組相比，均無統(tǒng)計學差異，同時，曲線下面積均無顯著下降(P值分別為:P=0.538;P=0.565)。
　　 5血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇的變化
　　 與正常組相比，模型組大鼠血清T

17、C、TG、和LD-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低(P＜0.05)，出現(xiàn)血脂異常。與模型組相比，血脂康組TG、TC和LDL-C水平均顯著降低(P＜0.05)，HDL-C無顯著變化(P=0.182)。逍遙丸組與模型組相比，TG和TC水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，HDL-C和LDL-C水平變化與模型組相比無統(tǒng)計學差異(P值分別為:P=0.499;P=0.442)。
　　 6肝臟p-Aktser473表達的變化

18、
　　 與正常組相比，模型組胰島素刺激后P-Aktser473/Akt顯著降低(P＜0.05)。與模型組相比，逍遙丸干預(yù)后，胰島素刺激的P-Aktser473/Akt顯著增加(P＜0.05);血脂康組胰島素刺激的P-Aktser473/Akt較模型組有一定量的增加，但尚未達到統(tǒng)計學差異(P=0.063)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.通過8周高脂飲食喂養(yǎng)可誘導(dǎo)大鼠空腹血糖受損、糖耐量異常，成功建立糖調(diào)節(jié)受損大鼠模型

19、，該模型可模擬人類生活方式改變所致糖調(diào)節(jié)受損的發(fā)病特點，提示生活方式與糖調(diào)節(jié)受損發(fā)病密切相關(guān)。
　　 2.逍遙丸能改善高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖，減少腹腔脂肪的堆積，能在一定程度上改善脂代謝紊亂，并可降低高脂飲食大鼠空腹胰島素水平，減少胰島素耐量曲線下面積，通過改善胰島素抵抗可將高脂飲食大鼠空腹血糖水平降至正常，效果明顯優(yōu)于血脂康。逍遙丸改善高脂飲食誘導(dǎo)大鼠空腹血糖受損的分子作用機制可能與其上調(diào)胰島素刺激后磷酸化的Aktser473的