CD4+CD29+T細(xì)胞與Th1-Th2在潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)證型中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　通過病證結(jié)合的方法建立中醫(yī)證型潰瘍性結(jié)腸炎動物模型，并與臨床研究相結(jié)合，探討CD4+CD29+T細(xì)胞與Th1/Th2在不同證型潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)及其相關(guān)性。
　　方法:
　　1.前期標(biāo)本收集
　　以南方醫(yī)院消化內(nèi)科門診、住院部及消化內(nèi)鏡中心的潰瘍性結(jié)腸炎患者31例及健康體檢者33例為研究對象，根據(jù)其證型分為健康組（15人）、單純濕熱組（18人）、非濕熱UC組（16人）和濕熱UC組（15人），收集外周

2、血和腸粘膜。
　　2.中醫(yī)證型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的建立與研究
　　60只SD大鼠隨機(jī)分為正常組（15只）、濕熱組（30只）和脾虛UC組(15只)。通過病證結(jié)合的方法建立相應(yīng)證型的UC模型:采用高濕高溫+高脂高糖飲食的方法建立濕熱模型，采用隔日足量飲食+番瀉葉灌胃+游泳疲勞的方法建立脾虛模型，以上造模持續(xù)8周;于第6周濕熱組隨機(jī)分為單純濕熱組（15只）和濕熱UC組（15只），在脾虛、濕熱造模的基礎(chǔ)上加用2，4-二硝基氯苯(D

3、NCB)/乙酸法建立相應(yīng)證型的UC模型。于第9周處死大鼠，收集外周血和結(jié)腸組織。
　　3.檢測方法
　　采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫雙熒光法檢測外周血和結(jié)腸中CD4+CD29+T細(xì)胞的表達(dá)水平，采用免疫組化法觀察結(jié)腸T-bet和Gata-3的表達(dá)水平，采用Elisa法檢測外周血和結(jié)腸組織勻漿中IFN-γ、IL-12和IL-4的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　動物實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示:
　　1.非濕熱（脾虛）UC組和

4、濕熱UC組CD4+CD29+、T-bet、IFN-γ、IL-12較正常組明顯升高(P＜0.05)，濕熱UC組CD4+CD29+、T-bet、IFN-γ、IL-12較非濕熱（脾虛）UC組升高(P＜0.05)。
　　2.非濕熱（脾虛）UC組Gata-3、IL-4較濕熱UC組高(P＜0.05)。
　　3.CD4+CD29+與T-bet、IFN-γ、 IL-12呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.通過病癥結(jié)合

5、方法可分別建立脾虛、濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，且在癥狀、病理及免疫上符合UC診斷。
　　2.濕熱型UC大鼠中有Th0向Th1分化的傾向，脾虛型UC大鼠中有Th0向Th2分化的傾向。
　　3.UC發(fā)病與CD4+CD29+T細(xì)胞增高、Th1/Th2失衡有關(guān)。其發(fā)病機(jī)制可能為在初期IFN-γ、IL-12刺激CD4+CD29+T細(xì)胞大量表達(dá)，其中一部分以記憶性CD4+CD29+T細(xì)胞的形式存儲下來，以Th1增高為主;中后期少量IF