長(zhǎng)期飲酒引起的Tau蛋白磷酸化和認(rèn)知功能障礙.pdf

1、研究背景：很多證據(jù)表明，阿爾茨海默?。ˋD）患者在病情發(fā)展過(guò)程中暴露于氧化應(yīng)激之中，且酒精參與肝臟的氧化應(yīng)激過(guò)程，同時(shí)飲酒也是AD的風(fēng)險(xiǎn)因子。然而，酒精是否參與腦組織氧化應(yīng)激過(guò)程以及AD發(fā)病機(jī)制尚未完全明晰。在本研究中，Morris水迷宮行為測(cè)試顯示：長(zhǎng)期飲用高濃度酒精誘發(fā)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)：長(zhǎng)期飲酒引起大鼠的腦組織氧化應(yīng)激損傷，PP2A活性降低，GSK-3β的活性升高以及Tau蛋白Ser199、Ser396和Thr4

2、04位點(diǎn)的異常過(guò)度磷酸化。應(yīng)用具有抗氧化損傷作用的化合物褪黑素同時(shí)處理飲酒大鼠，可逆轉(zhuǎn)長(zhǎng)期飲酒所致的大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙，恢復(fù)PP2A與GSK-3β活性、以及Tau蛋白磷酸化水平。這些研究結(jié)果表明：長(zhǎng)期飲酒通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，導(dǎo)致Tau蛋白的過(guò)度磷酸化和認(rèn)知功能的障礙。
　　目的：探討長(zhǎng)期飲酒對(duì)大鼠Tau蛋白磷酸化修飾以及學(xué)習(xí)記憶的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：雄性SD大鼠24只，清潔級(jí)，體重220±20g，四月齡，由華中科技

3、大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，大鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組8只（給予生理鹽水，連續(xù)五周）；模型組8只（灌胃給予糧食酒（衡水老白干52°）4ml/kg/day，連續(xù)五周）；治療組8只（灌胃給予糧食酒4ml/kg/day+ Melatonin40μg/day，連續(xù)五周），20-25℃飼養(yǎng)，所有動(dòng)物均自由飲水和攝食，五周后通過(guò)水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶，處理動(dòng)物。
　　結(jié)果：
　　（1）與對(duì)照組相比，長(zhǎng)期飲酒大鼠無(wú)論在海馬還是皮

4、質(zhì)，SOD水平顯著性（p<0.05）降低，MDA水平顯著性（p<0.05）升高，褪黑素治療組沒(méi)有顯著性改變，提示長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致大鼠大腦氧化應(yīng)激，而褪黑素具有明顯的對(duì)抗飲酒所致的氧化應(yīng)激。
　　（2）酶活性檢測(cè)：與對(duì)照組相比，長(zhǎng)期飲酒大鼠無(wú)論在海馬還是皮質(zhì)，PP2A的活性顯著性（p<0.05）降低，GSK-3β活性顯著性（p<0.05）升高。用褪黑素處理之后，相對(duì)于長(zhǎng)期飲酒大鼠，PP2A的活性有升高的趨勢(shì)，GSK-3β活性有降低的趨勢(shì)

5、。
　　（3）Western Blotting結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，長(zhǎng)期飲酒大鼠Tau蛋白的Ser199，Ser396，Ser404位點(diǎn)磷酸化水平顯著性（p<0.05）升高，PP2Ac Y307位點(diǎn)磷酸化水平顯著性（p<0.05）升高，PP2Ac309位點(diǎn)甲基化水平?jīng)]有顯著性改變。褪黑素處理可逆轉(zhuǎn)長(zhǎng)期飲酒大鼠所致的皮質(zhì)區(qū)域PP2Ac Y307位點(diǎn)磷酸化水平的升高。
　?。?）Morris水迷宮結(jié)果顯示：在六天的訓(xùn)練后，與對(duì)

6、照組相比，長(zhǎng)期飲酒大鼠六天學(xué)習(xí)過(guò)程中尋找平臺(tái)的時(shí)間比對(duì)照組時(shí)間延長(zhǎng)，第七天空間搜索實(shí)驗(yàn)(spatial probe test)的結(jié)果顯示：各組游泳速度沒(méi)有明顯差，但長(zhǎng)期飲酒大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少，找到平臺(tái)的時(shí)間明顯比延長(zhǎng)。用褪黑素治療之后，可以恢復(fù)上述指標(biāo)。提示長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶發(fā)生障礙，用褪黑素治療長(zhǎng)期飲酒大鼠之后，可逆轉(zhuǎn)長(zhǎng)期飲酒所致的大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙。
　　結(jié)論：長(zhǎng)期飲酒誘導(dǎo)大鼠大腦產(chǎn)生氧化應(yīng)激、PP2A活性降低